9 J. Keutner, Über das Vorkommen und die Verbreitung stickstofibindender Bakterien im Meere. 35 
Es war nun noch weiter zu entscheiden, ob das Sterilbleiben der mit filtriertem Wasser gefüllten 
Kolben darauf zurückzuführen war, daß Azofobacter infolge seiner relativen Größe von dem Filter zurück- 
gehalten wurde oder aber darauf, daß er auf größeren Organismen sitzt, die ihrerseits nicht durch das 
Filtrierpapier hindurchgehen. Letztere Annahme fand ich durch die von mir ausgeführten, nun folgenden 
Filtrationsversuche bestätigt. 
Ich brachte einen Teil einer Azofobacter-Rohkultur in ein mit Glasstopfen verschlossenes Fläschchen 
und schüttelte die Flüssigkeit derart, daß die Zellen sich von einander trennten und möglichst gleichmäßige 
darin verteilt waren, brachte alsdann die trübe Masse auf Filter von derselben Qualität wie bei den 
vorhergehenden Versuchen und untersuchte die durchgelaufene Flüssigkeit auf die Anwesenheit von 
Azotobacter. 
Als Resultat war zu verzeichnen, daß ich in zahlreichen, von mir untersuchten Proben, jedesmal 
den Azotobacter im Filtrat antreffen konnte. Hieraus folgte, daß letzterer bei den oben beschriebenen 
Versuchen unbedingt auf größeren Organismen des Plankton gesessen haben muß. 
Um einem Mißverständnis vorzubeugen, möchte ich bemerken, daß ich keineswegs behaupten will, 
daß jener Spaltpilz niemals im Wasser, sondern immer nur auf Organismen nachzuweisen sei; jedoch ist 
es nicht ausgeschlossen, daß Azofobacter vorwiegend auf Organismen vorkommt, indem er dort reich- 
licher Nahrung findet als in dem Wasser selbst, daß er jedoch ähnlich wie die Leuchtbakterien, welche auf 
den Leibern toter Fische leben, durch den Wellenschlag und andere äußere Umstände von seinem natür- 
lichen Substrat losgerissen wird und daher ab und zu auch direkt im Wasser nachgewiesen werden kann. 
Aus diesen Resultaten ergibt sich nun die Disposition für meine Arbeit. 
Ich betrachte zunächst das Vorkommen von Azofobacter und anderen stickstoffbindenden Bakterien 
am Meeresgrund, hierauf an festgewachsenen Algen, schließlich an Organismen des Planktons. 
Schlickkulturen. 
Ich bespreche zuerst die Kulturen, deren Impfmaterial aus der Kieler Bucht stammt und schließe 
hieran diejenigen aus anderen Gegenden der Ostsee, ferner aus der Nordsee und dem Indischen Ozean an. 
Falls Ostseeschlick als Impfmaterial diente, wurde derselbe gewöhnlich in der Gegend der Heulboje oder 
in der Nähe des Feuerschiffes am Ausgange der Kieler Föhrde mittelst eines schweren, vorher steril ge- 
machten, eisernen Hohlzylinders heraufgeholt. Letzterer war an dem einen Ende mit einem Stück Leinewand 
überbunden. Der auf diese Weise heraufgebrachte Schlick, der bald schwarz, bald grau aussah, wurde 
alsdann in sterile, mit Wattepfropf verschlossene Flaschen übergeführt, um von hier aus mittelst einer 
sterilen Platinöse oder eines ebenfalls steril gemachten Wägegläschens in die bereits keimfrei gemachten 
Nährlösungen eingeimpft zu werden. 
Über die genaue Zusammensetzung der Kulturflüssigkeiten findet sich das Nähere in den am Schluß 
der Arbeit folgenden Tabellen. 
Die ersten Untersuchungen über Schlickproben wurden im Februar 1903 in Gang gesetzt. Die in 
oben erwähnter Weise hergestellten, beimpften Kolben zeigten bereits nach drei bis vier Tagen eine schwache 
Trübung. Einige Tage später konnte man die Bildung eines dünnen, an der Oberfläche der Nährlösung 
umhertreibenden Häutchens, wahrnehmen. Gleichzeitig wurde ein immer stärker werdendes Aufsteigen von 
Gasblasen beobachtet. Die in einigen Fällen zugesetzte Kreide löste sich allmählich auf, ein sicheres Zeichen 
dafür, daß eine Säure ausgeschieden wurde. An der Innenwandung des Kulturgefäßes, etwa im Niveau der 
Nährlösungen, bildete sich eine gallertartige, schleimige, schmutzig-gelbe, mit dem Alter braun werdende 
Masse. Man beobachtete, daß in Mannitlösungen derartig gelblich-braune Anhäufungen jene in Dextrose- 
kulturen an Ausdehnung bedeutend übertrafen. Sie bildeten förmlich einen, an der Glaswand haftenden, 
vollständig in sich geschlossenen Ring von der Dicke eines Bleistiftes. Auch darin zeigte sich ein Unter- 
schied, daß bei Kulturen mit Dextrose die Gährung in der Regel eher einsetzte und stets eine intensivere 
war, als bei Nährlösungen, welche Mannit als Kohlenstoffquelle enthielten. Dasselbe konnte man auch bei 
Schlickkulturen, im Gegensatz zu Planktonkulturen, beobachten. Bemerkenswert ist ferner, daß in den Ge- 
fäßen mit hoher Flüssigkeitssäule die Gährung eine kräftigere war, als bei solchen mit einer weniger hohen. 
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