Anhang. 
Das Vorkommen der stickstoffbindenden Bakterien an Süßwasserpflanzen. 
Die Entdeckung von Azotobacter und Clostridium auf festsitzenden und treibenden Meeresalgen 
legte es nahe, auch Süßwasserpflanzen auf das Vorhandensein jener Bakterien zu untersuchen. 
Ich stellte zu diesem Zwecke eine Reihe, mit Nährlösung (Lösungsmittel: Leitungswasser) beschickter 
Kolben in der bekannten Weise her und beimpfte dieselben mit Plankton, weches ich auf dem Lankener 
See bei Preetz gefischt hatte. Außerdem wurden Azolla, Lemna minor, Spirogyra und Volvox als Impf- 
material benutzt. Die drei erstgenannten Arten gelangten unter möglichster Vermeidung einer Infektion 
in die Nährlösungen. Velvox wurde außerdem noch einem besonderen Reinigungsverfahren unterworfen. 
Es geschah dies, indem eine Kolonie in ein mit Glasstöpsel versehenes, mit Leitungswasser bis zur 
Hälfte gefülltes steriles Fläschchen gebracht, einigemal kräftig geschüttelt und auf ein steriles Filter über- 
führt wurde. Hierauf spülte ich dreimal gründlich mit Leitungswasser ab und impfte das Kügelchen mittelst 
einer vorher ausgeglühten Platinnadel in die sterile Nährlösung ein. 
Ich bespreche zunächst die Volvox- und Spirogyra-Kulturen. Wie auf Tabelle Nr. 16 vermerkt, 
wurden dieselben am 5. August in Gang gesetzt. Während der Ferien standen sie in einem dunklen 
Schrank, sich selbst überlassen. Der Verlauf der Entwicklung in den einzelnen Kolben wird jedenfalls 
derselbe gewesen sein, wie ich ihn bei den früheren Kulturen mit Meeresplankton oder festsitzenden Algen, 
als Impfmaterial beschrieben habe. Jedenfalls zeigte sich Mitte Oktober, daß sämtliche geimpfte Kolben 
eine kräftige Entwicklung von Bakterien aufzuweisen hatten. Der charakteristische braune Gallertring ließ 
schon auf die Gegenwart von Azotobacter, das Verschwundensein der Kreide und der Geruch nach Butter- 
säure auf Closiridium schließen. 
Die mikroskopische Untersuchung bestätigte die Vermutung. Clostridium sowohl als Azofobacter 
konnten genau mit den aus dem Meere kultivierten Bakterien identifiziert werden. 
Die Analyse nach Kjeldahl ergab eine recht reichliche Anreicherung an gebundenem Stickstoff. 
Wie bei allen übrigen Versuchen, bei welchen mit festsitzenden oder treibenden Algen geimpft wurde, 
war auch bei den Süßwasserkulturen Azofobacter chroococcum stets in beträchtlicher Überzahl vorhanden, 
obwohl auch Clostridium Pasteurianum ohne Schwierigkeit nachgewiesen werden konnte. 
Die Kulturen mit Azolla und Lemna wurden am 23. Oktober angesetzt. Sie ergaben ebenfalls, 
mit Rücksicht auf. die Kürze der Versuchsdauer, eine erhebliche Menge durch Azofobacter und Clostridium 
gebundenen Stickstoff. 
Azolla, die hierbei als Impfmaterial diente, überzog die ganze Oberfläche des Teiches des Kieler 
botanischen Gartens, wie ein dicker, rötlich-grüner Teppich. Derselbe hatte sich während der Herbstferien 
aus einer kleinen Zahl von Pflänzchen entwickelt, die anfangs Juli in den Teich eingebracht waren. Dieses 
förmlich „explosionsartige“ Auftreten des genannten Wasserfarnes, das offenbar mit einer recht beträchtlichen 
Eiweißsynthese Hand in Hand ging, ließ die Vermutung nicht ungerechtfertigt erscheinen, daß diese Eiweiß- 
produktion mindestens zum Teil mit Hilfe des auf dem Azolla-Pflänzchen kulturell nachgewiesenen 
Azotobacter, d. h. auf Kosten des Stickstoffs der Luft vor sich gegangen war. Um diese Vermutung zu 
stützen, versuchte ich auch hier den direkten mikroskopischen Nachweis des Azofobacters an seinem 
natürlichen Standort. Dasselbe gelang über Erwarten leicht. 
