278 M. Keding, Weitere Untersuchungen über stickstoffbindende Bakterien. 6 



Bakterien aufgenommen. Die Wirkungsweise der Bakterien in den Kombinationen Azotobacter -f Radio- 

 bacter und Azotobacter + Aerogenes soll eine ähnliche sein. 



Dem gegenüber berichtet Löhnis^'-), der die im Boden mit Azotobacter vergesellschaftet vor- 

 kommenden stickstofffixierenden Bakterien eingehender untersuchte, daß Bact. radiobacter Stamm 1 und 2, 

 Bact. pneumoniae, lactis viscosum, radicicola (Klee und Wicke), prodigiosum und auch Azotobacter in 

 Reinkulturen Stickstoff fixieren. Allerdings zeigten diese Stämme in stickstofffreien Mannitlösungen „über- 

 haupt keine oder eine äußerst dürftige Entwickelung, und eine Stickstoffzunahme konnte nicht nachgewiesen 

 werden". Um in Reinkulturen dieser Bakterien eine Stickstoffanreicherung zu erlangen, ist es wichtig, daß 

 man möglichst frische Kulturen verwendet, und daß eine geeignete Stickstoffverbindung zur Einleitung des 

 Assimilationsprozesses anwesend ist. In Kombinationen Az. -|- Bact. radiobacter, Az. -j- Bact. prodigiosum 

 und Az. -f- Bact. agreste konnte Löhnis keine Unterschiede hinsichtlich der Stickstoffanreicherung gegen- 

 über den Reinkulturen feststellen. Zu demselben Ergebnis betreffs der Kombination Azotobacter + Radio- 

 bacter kommt neuerdings Stoklasa'^). In dieser Kombination erzielte der Autor nicht nur keine größeren 

 Stickstoffgewinne wie in Reinkulturen, sondern sogar geringere. 



In dieser Arbeit soll das Vorkommen von Azotobacter in der westlichen Ostsee und in den ver- 

 schiedenen Bodenarten und Bodentiefen in der Umgebung von Kiel untersucht werden ; im Anschluß daran 

 soll das Verhalten dieses Spaltpilzes gegenüber Koch- und Seesalz geprüft werden. Da die Kultur- 

 bedingungen von stickstoffsammelnden Bakterien in Nährlösungen wesentlich andere sind, als im Erdboden, 

 so sollten vergleichende Versuche über die Stickstoffbindung unter Beibehaltung möglichst natürlicher Ver- 

 hältnisse angestellt werden. Ferner war zu untersuchen, wie lange Azotobacter in lufttrockener Erde 

 lebensfähig blieb. Schließlich sollte nochmals der Beweis erbracht werden, daß Azotobacter auch in ein- 

 wandfreien Reinkulturen Stickstoff binden kann, und untersucht werden, inwiefern sich von diesen die 

 künstlichen Mischkulturen unterscheiden. 



Analytische Methode und Reagenzien. 



Die Stickstoffbestimmungen wurden sämtlich nach Kjeldahl ausgeführt. Die Jodlbauer'sche 

 Methode brauchte nicht in Anwendung gebracht zu werden, da in keinem Falle Nitrate in beträchtlicher 

 Menge vorhanden waren. Von der zur Untersuchung gelangenden Erde wurden jedesmal 25 g (getrocknet) 

 mit möglichst wenig Wasser ausgekocht, filtriert, und das Filtrat mit Diphenylamin-Schwefelsäure auf An- 

 wesenheit von Nitraten geprüft. — Der Inhalt eines Versuchskolbens wurde unter Vermeidung jeglichen 

 Verlustes in einen Zersetzungskolben aus Jenenser Glas von 300 oder 500 cbcm Inhalt gebracht und nach 

 Zusatz von 10—20 cbcm Schwefelsäure, die mit SO3 gesättigt war, 0,7 g metallischem Quecksilber und 

 einigen Tonstückchen, um zu starkes Stoßen zu verhindern, sofort mit großer Flamme erhitzt. Ich machte 

 die Beobachtung, daß die Flüssigkeit in den Kolben, denen Erde oder Sand als Impfmaterial zugesetzt 

 war, beim Sieden stark aufstieß, während die Zersetzung der übrigen Kulturen ruhig verlief. Beginnt die 

 Einwirkung der Schwefelsäure auf den Zucker, so wird das Erwärmen mit möglichst kleiner Flamme fort- 

 gesetzt. Dadurch wird verhindert, daß die schwarze, breiige Masse mit den oberen Teilen des Kolbens in 

 Berührung kommt, das Festkleben kleiner Teilchen dort wird vermieden, und das lästige Umschwenken der 

 Kolben unnötig. Wenn sich die weißen Schwefelsäuredämpfe zu entwickeln beginnen, kann man wieder 

 mit starker Flamme erhitzen. Nachdem die Flüssigkeit farblos resp. weiß geworden ist, schwenkt man 

 die Kolben einige Male um und läßt noch 10 Minuten lang sieden, worauf die Zersetzung beendet ist. 

 Destilliert wurde nach Zusatz von 75 cbcm Natronlauge vom spez. Gewicht 1,374, die vorher in einem 

 Mischzylinder mit 8 cbcm Schwefelkaliumlösung (1 : 10) gemischt war, ev. auch unter Zugabe von einigen 

 Zinkstückchen, um zu starkes Stoßen zu vermeiden. Durch mehrere Parallelanalysen wurde ausgemacht, daß 

 eine Fehlerquelle durch diesen Zinkzusatz nicht bedingt ist. Als Vorlage dienten 10, oder, wenn eine 



größere Menge Stickstoff zu erwarten war, 20 cbcm -^ Schwefelsäure. Die durch das übergehende Am- 

 moniak nicht neutralisierte Schwefelsäure wurde durch ^ Natronlauge gemessen. Als Indikator dienten 



