9 M. Keding, Weitere Untersuchungen über stickstoffbindende Bakterien. 281 



sich auch Clostridien und trommelschlägerförmige Bakterien ein. Nach 7 Tagen begannen sich auch die 

 mit Ceramiiim rul)rum, Phyllophora Brodiaei und Delesseria sanguinea beschickten Kolben zu trüben. 

 Das makroskopische wie das mikroskopische Aussehen war dem der obenerwähnten Kulturen sehr ähnlich, 

 und erwähnenswerte Unterschiede waren nicht zu bemerken. Nach 3 Wochen hatte sich auf der Oberfläche 

 sämtlicher 6 Kulturen eine dichte Kahmhaut gebildet, die vorwiegend aus Azotobaktcrzellen bestand. 



Weitere 6 Kolben, welche dieselbe Nährlösung enthielten und auf dieselbe Art sterilisiert waren, 

 wie die vorigen, wurden auf folgende Weise beimpft: von den einzelnen Algen wurde mit einem sterilen 

 Skalpell vorsichtig ein wenig von dem auf der Oberfläche vorhandenen Schleim abgeschabt und mit einem 

 sterilen Platindraht in die Kolben gebracht. Diese Kulturen wurden zugleich mit den eben beschriebenen 

 angesetzt. Bei ihnen sah man schon nach 5 Tagen eine leichte Trübung eintreten; nach 14 Tagen war 

 an der Oberfläche eine Kahmhaut gebildet, die vorwiegend aus Azotobaktcrzellen bestand. Von den Be- 

 gleitbakterien waren die oben erwähnten vier Typen vorherrschend; in einigen Kulturen traten die Trommel- 

 schlägerformen sehr zahlreich auf. 



An der Oberfläche aller von mir untersuchten Algen der Kieler Förde und Bucht war das Vor- 

 handensein von Azotobacter festzustellen. Eine chemische Analyse zur quantitativen Bestimmung des ge- 

 bundenen Stickstoffs wurde nicht ausgeführt, da es mir auf eine Feststellung des Vorhandenseins von 

 Azotobacter auf den Algen ankam. Auf eine Zunahme an Stickstoff deutete schon die in den stickstoff- 

 armen Nährlösungen sich reich entwickelnde Bakterienflora. Der durch Blankobestimmungen ermittelte 

 Stickstoffgehalt der zu diesen Kulturen verwendeten Nährlösung betrug 0,52 bis 0,56 mg in 100 Kubik- 

 zentimetern. 



Über das Wesen der Symbiose zwischen Azotobacter und den Algen konnte ich nichts Genaueres 

 feststellen. Die Frage, ob Azotobacter allein imstande ist, Stickstoff zu binden, oder ob er diese Eigen- 

 schaft durch die Symbiose mit den Algen oder Bakterien erwirbt, soll später untersucht werden. 



b) Azotobacter in Koch- und Seesalzlösungen. 



Über den Einfluß von Natriumchlorid auf Azotobacter sind bis jetzt folgende Erfahrungen gemacht 

 worden: Keutner'') gibt an, daß Natriumchlorid im allgemeinen einen günstigen Einfluß auf die Ent- 

 wickelung von Azotobacter hat. Dabei ist aber aus seinen Angaben nicht zu ersehen, ob er den Azotobacter 

 aus der Ostsee oder den des Festlandes im Auge hat. Ein Zusatz von 3 % Natriumchlorid zur Nährlörung 

 hat einen günstigeren Einfluß gehabt als einer von 1 und 2 °/o. Nach Thiele-) wirkt die Darbietung von 

 Kochsalz eher hemmend als fördernd auf das Gedeihen von Azotobacter. Eine Nährlösung von der Zu- 

 sammensetzung Wasser 1000, Dikaliumphosphat 0,5, Calciumcarbonat 0,5, Magnesiumsulfat 0,5, Natrium- 

 chlorid 0,5, Man'nit oder Traubenzucker ergab in 2 Versuchen 27,553 resp. 33,517 mg Stickstoffgewinn, 

 höher war dieser schon, wenn Calciumcarbonat und Natriumchlorid fehlten, nämlich 44,017 resp. 47,979 mg; 

 und enthielt die Nährlösung nur 1000 Wasser, 0,5 Dikaliumphosphat und 0,5 Calciumcarbonat so stieg der 

 Ertrag auf 65,573 resp. 74,178 mg. Hiernach scheint die Darbietung von Natriumchlorid eher hemmend 

 auf Azotobacter zu wirken. Auch ich konnte durch Zusatz von Kochsalz keine bessere Entwickelung der 

 Azotobactermischkulturen feststellen. Wie aus den Tabellen 1 a und 3 und den dazugehörigen Kurven 1 a 

 und 3 ersichtlich, haben die Kolben, welche kein Natriumchlorid oder Seesalz enthielten, sogar eine größere 

 Stickstoffanreicherung aufzuweisen, als die mit steigendem Salzgehalt. Bei der in Tabelle 2 und Kurve 2 

 zusammengestellten Versuchsreihe ist die Stickstoffbindung bei und 1% Seesalz die gleiche; von einer 

 günstigen Einwirkung des Seesalzes auf Azotobacter ist auch hier nicht die Rede. 



Schon Keutner (1. c.) hatte gefunden, daß bei einer Kochsalzkonzentration von 8% noch ein, 

 wenn auch geringes, Wachstum und eine Stickstoffzunahme stattfindet. Um zunächst die Wirkung von 

 Natriumchlorid auf Azotobacter festzustellen, wurden 10 Kolben mit je 75 cbcm Nährlösung von der Zu- 

 sammensetzung: dest. Wasser 100 cbcm, Mannit 2 g, Dikaliumphosphat 0,05 g, Magnesiumsulfut 0,02 g. 

 Kreide 0,1 g angefüllt, und außerdem dem 1. Kolben 1 ° o, dem 2. Kolben 2% ..... dem 10. Kolben 

 10% Natriumchlorid zugesetzt. Die Kolben wurden an 3 aufeinander folgenden Tagen im Dampfstrom 

 bei 100° je 20 Minuten lang sterilisiert, dann alle in gleicher Weise beimpft mit drei Platinösen Bakterien- 



