19 M. Kediiig, Weitere Untersuchungen über stickstoffbindende Bakterien. 291 



zentiger Mannitlösung reicht iiin, um eine Slickstoffzunahme von 151 mg in 275 g Erde zu veranlassen, 

 wenn gleichzeitig dafür gesorgt wird, daß die Erde feuclit bleibt und einer Durchlüftung zugänglich ist. 

 Der Zusatz von Thomasphosphatmehl scheint ohne Einfluß auf die Wirkung der stickstoffsammelnden 

 Bakterien gewesen zu sein. 



Die Stickstoffanreicherung, die in sämtlichen 5 Erdproben stattgefunden hat, wird, wenn man die 

 Angaben von Warmbold (1. c.) in Betracht zieht, noch wesentlich größer sein. Denn die oben 

 angegebenen Werte stellen nur die Stickstoffmengen dar, die durch Bakterientätigkeit gebunden worden 

 sind; dagegen ist die auf chemischen Prozessen beruhende Stickstoffzunahme nicht in ihnen enthalten. 

 Solche Prozesse spielen sich in rohem wie in sterilem Boden ab; dementsprechend hat also auch die Erde 

 auf Teller Nr. 4 eine Stickstoffzunahme erfahren. 



Die Stickstoffbindung in Reinliulturen von Azotobacter chroococcum. 



In diesem Abschnitte beabsichtige ich nochmals den Beweis zu erbringen, daß Azotobacter im- 

 stande ist, auch in einwandfreien Reinkulturen den atmosphärischen Stickstoff zu binden, was bekanntlich 

 von Beijerinck verneint wurde. Um Reinkulturen überhaupt zu erhalten, ging ich von dem ver- 

 schiedensten Material aus, wie Seesand, Ostseewasser, Plankton, Schlick, verschiedenen Erdproben etc. Aus 

 allen diesen Ausgangsmaterialien ließ sich wohl leicht Azotobacter gewinnen, aber Reinkulturen waren nicht 

 zu erlangen. Ich kann hier nur die Angaben von Thiele-) bestätigen, die besagen, daß es ihm durchaus 

 nicht mit der gewöhnlich behaupteten Leichtigkeit gelungen ist, Reinkulturen von Azotobacter zu erhalten. 

 Mir ist es häufig vorgekommen, daß er schon nach dem dritten Überimpfen von den Begleitbakterien 

 unterdrückt wurde und überhaupt nicht mehr zur Entwicklung kam. Von der ersten Rohkultur wurde 

 wieder in Nährlösungen übergeimpft oder auf Agarplatten. Die weiteren Überimpfungen geschahen meist 

 abwechselnd in Nährlösungen oder auf Agarplatten. Zuweilen wurden auch Gipsplatten, die mit Mannit- 

 nährlösung getränkt waren, eingeschoben. Auf diesen fand ein sehr intensives Wachstum von Azotobacter 

 statt; das Braunwerden der Kolonien trat auf ihnen schon sehr früh ein (auf einer Platte schon nach 

 3 Tagen!). Zum Überimpien wurde eine Platinöse mit Azotobacterkahmhaut in 50 cbcm physiologischer 

 Kochsalzlösung aufgeschwemmt, und von diesem Material eine Platinöse voll in die sterilen Nährlösungen 

 gebracht, resp. in dem noch flüssigen Agar verteilt. Aber trotz aller Maßnahmen und Bemühungen 

 war es nicht möglich, Reinkulturen von Azotobacter zu erhalten. Ein in allen Kolonien vorhandenes 

 stäbchenförmiges Bakterium schien von ihm nicht getrennt werden zu können. Vielleicht ist dieses identisch 

 mit dem von Thiele-) erwähnten Bact. inoleste, soviel man aus seinen bisherigen Angaben schließen kann. 



Bei den im vorhergehenden Abschnitt behandelten Versuchen wurde auch wie erwähnt von jedem 

 Teller 0,5 g Efde in stickstofffreie Nährlösungen gebracht. Nun enthielt schon eine aus der Erde auf 

 Teller Nr. 6 stammende Kultur nach dem ersten Überimpfen nur noch Azotobacter und den erwähnten 

 Begleiter, und zwar ersteren in so großer Mehrzahl, daß ich anfangs der Meinung war, eine Reinkultur 

 vor mir zu haben. Die Azotobacterzellen hatten ein durchaus normales Aussehen und waren in lebhafter 

 Teilung begriffen. Diese Kultur schien mir als Ausgang für Reinkulturen sehr geeignet, und es gelang 

 mir, nach drei Überimpfungen auf einer Agarplatte mehrere Azotobacterkolonien zu finden, die ohne diese 

 lästigen Begleiter waren. Von diesen wurde eine Spur in stickstofffreie Nährlösungen, auf Agar- und Gips- 

 platten ausgesät. In einigen Kolonien trat zwar der Begleiter trotzdem wieder auf, die meisten erwiesen 

 sich aber als Reinkulturen von Azotobacter und wurden als Ausgangsmaterial verwendet. 



Da Azotobacter auf Agar- und Gipsplatten besser und schneller wächst als in Nährlösungen wurden 

 zuerst eine Anzahl Agarplatten mit dem gewonnenen reinen Impfmaterial beschickt. Eine Platte wurde 

 außerdem mit Mykoderma (spez. ?) beimpft. Nach 3 Tagen waren auf allen mit Azotobacter beimpften 

 Platten die Impfstriche sichtbar, die sich durchgängig als rein erwiesen. Nach Ablauf von 10 Tagen 

 wurden die immer breiter werdenden Impfstriche über die ganze Fläche der Platten verteilt, um eine 

 möglichst gute Ausnutzung der Nährstoffe zu ermöglichen. Auf einer Platte hatte sich ein Penicilliiini 

 eingefunden, zwei andere hatten sich während der ganzen Zeit nicht verfärbt, während alle anderen eine 

 dunkelbraune Farbe annahmen. Der Grund für das abweichende Verhalten des Spaltpilzes auf diesen 



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