292 M. Keding, Weitere Untersuchungen über stickstoffbindende Bakterien. 20 



beiden Platten war nicht ersichtlich, da der Nährboden überall derselbe war, und die Zellen mikroskopisch 

 dasselbe Aussehen hatten wie die auf den anderen Platten. Auf der mit Mykoderma beimpften Platte 

 trat eine schwache Vermehrung des Pilzes ein auf Kosten der im Agar vorhandenen Stickstoffverbindungen. 

 Vor dem Analysieren wurde der Inhalt der Petrischale, der, über die ganze Oberfläche ausgebreitet, eine 

 einzige riesige Azotobacterkolonie bildete, noch einmal mikroskopisch untersucht, und es stellte sich 

 heraus, daß, abgesehen von zwei durch Penicillium verunreinigten Schalen, alle nur Azotobacter enthielten. 

 Das Aussehen der Azotobacterzellen war normal wie in frischen Rohkulturen, der Inhalt war körnig und 

 färbte sich mit Jodjodkalium gelbbraun. Viele Zellen waren noch im Teilungsstadium befindlich; Schleim- 

 hüllen fehlten. — Der zu diesen Versuchen verwendete Agar war vorher nach der im Abschnitt „Analytische 

 Methode und Reagenzien" angegebenen Weise gereinigt worden. 



Zwecks der Analyse wurde der Inhalt der Petrischalen (Azotobactermasse -|- Nährboden) mit einem 

 Glasspatel in die Zersetzungskolben gebracht, und die Schalen mit 75 cbcm destilliertem Wasser aus- 

 gespritzt. Man kann so bei einiger Vorsicht ohne alle Substanzverluste arbeiten. Wie aus Tabelle 7 zu 

 ersehen, hat auf allen Platten'^) eine Zunahme an Stickstoff stattgefunden, die bedeutendste auf Nr. 2 

 nämlich 2 mg bei 12,4 g Nährboden. Bemerkenswert ist, daß die beiden Platten, auf denen die Kolonien 

 sich nicht gebräunt hatten, nur eine geringe Stickstoffzunahme aufzuweisen haben. 



Weiterhin wurde noch eine Anzahl Kolben mit verschiedenen Nährlösungen mit je einer Platinöse 

 von dem reinen Impfmaterial beschickt. 



Die erste Versuchsreihe sollte unter anderen auch der Frage näher treten, ob ein Zusatz von 

 Calcium zur Kulturflüssigkeit für das Wachstum und die Stickstoffassimilation von Azotobacter durchaus 

 notwendig sei. Daher wurden dem doppelt destillierten Wasser an Nährstoffen nur 2'^,oMannit und 0,05% 

 Dikaliumphosphat zugesetzt. Die Kulturflüssigkeit der beiden anderen Versuchsreihen war mit Leitungs- 

 wasser hergestellt, die eine enthielt Mannit, die andere d-Glukose als Kohlenstoffquelle. Die Temperatur 

 bei diesen Versuchen betrug 20 bis 25 ". Das kulturelle Verhalten der Reihen blieb sich im ganzen 

 gleich. Bis zum ersten Sichtbarwerden der Bakterientätigkeit, kenntlich an einer Trübung der klaren 

 Kulturflüssigkeit, vergingen meistens 8 bis 10 Tage, bei der ersten Reihe jedoch 14 bis 16 Tage. Bei ein- 

 getretener Trübung wurden alle Kulturen mikroskopisch untersucht. Ihr Aussehen unter dem Mikroskop 

 war kaum verschieden. Auffallend war die verschiedene Größe der Azotobacterzellen. Häufig sind 2 bis 5// 

 große bewegliche Diplokokken mit großkörnigem, tropfenartigem Inhalt. Durch Teilung jeder der beiden 

 Zellen entstehen 4 bis 5// große, aus vier rundlichen Zellen bestehende Kettchen. Bei manchen größeren 

 Diplokokken war schon eine Schleimhülle von einiger Dicke zu bemerken. Die Einzelzellen zeigten eben- 

 falls beträchtliche Größenunterschiede: ganz kleine Va, ^A und !/< große bis zu 4// im Durchmesser. 

 Diese großen Zellen führten reiche Inhaltsstoffe in Form von Körnchen und stark lichtbrechenden 

 Tropfen. Wenn sie eine bestimmte Größe erlangt haben, scheint der Inhalt in einzelne Teilstückchen 

 zu zerfallen, die nach Zerplatzen der Membran in die umgebende Flüssigkeit austreten und selbständig 

 weiter leben. Solche zerrissenen leeren Membranen konnte ich bei vielen Präparaten beobachten. In 

 einigen Kulturen waren besonders schöne Sarzinaformen vorhanden, oft so zahlreich, daß außer ihnen nur 

 wenige Einzelzellen zu sehen waren. — Sonst aber ergab die Untersuchung, daß die Kulturen nur Azoto- 

 bacterzellen enthielten. 



Nach Ablauf der Versuchszeit wurden sämtliche Kulturen noch einmal untersucht, und es wurde 

 festgestellt, daß keine nachträgliche Infektion der Reinkulturen stattgefunden hatte, abgesehen davon, daß 

 sich bei einigen Kulturen ein Penicillium eingefunden hatte. Makroskopisch hatten sie ein anderes Aus- 

 sehen als gleichalterige Mischkulturen. Bei diesen ist in der Regel eine Kahmhaut ausgebildet, die größten- 

 teils aus Azotobacterzellen besteht und nach einiger Zeit dunkelbraun wird. In den Reinkulturen fehlten 

 diese Kahmhäute gänzlich, dafür hatten sich die Bakterienmassen in schleimigen Klumpen am Boden der 

 Kolben angesammelt. Die Schleimbildung trat überall stark hervor, zuweilen war die ganze Kulturflüssig- 

 keit in eine gallertige Masse umgewandelt. Mit diesem makroskopischen Aussehen der Kulturen stand 

 das mikroskopische im Einklang. Um die Einzelzellen, Diplokokken und Sarzinaformen hatten sich riesige 



*) Ausgenommen auf der mit Mykoderma (spec. ?) beimpften. 



