21 M. Keding, Weitere Untersuchungen über stickstoffbindende Bakterien. 293 



Schleimliüilen gebildet. Normal aussehende Zellen waren in keiner Kultur mehr anzutreffen; dagegen 

 durchganjiig unregelmäßige, mit Auswüchsen und Einbuchtungen versehene Invoiutionsformen, die nicht 

 von SchleimhüUen umgeben waren, in Mischkulturen waren Involutionsformen bei gleich langer Versuchs- 

 zeit äußerst selten, Schleimbildungen habe ich hier nicht beobachten können; die Azotobacterzellen hatten 

 ein normales Aussehen. 



Die Ergebnisse der chemischen Analyse sind auf den Tabellen 8, 9 und 10 angegeben. Eine Zu- 

 nahme an Stickstoff hatte in allen Kulturen stattgefunden; diejenigen, welche durch Penici/lium verunreinigt 

 waren, haben im allgemeinen eine unter dem Durchschnitt bleibende Zunahme an Stickstoff aufzuweisen, 

 was wahrscheinlich auf die durch diesen Pilz ausgeschiedene Säure zurückzuführen ist. Denn wo kohlensaurer 

 Kalk zugesetzt war, ist der schädliche Einfluß der von dem Pilze ausgeschiedenen Säure weniger zu merken 

 als bei den Kulturen ohne Kreide (Kultur Nr. 1 und 2 auf Tabelle 8). Die durchschnittliche Stickstoff- 

 anreicherung in den Kulturen der ersten Reihe dieser Versuche (Tabelle 8) ist geringer als in den der beiden 

 anderen (Tabelle 9 und 10). Demnach hat der Zusatz von Calcium und die Verwendung von kalkhaltigem 

 Wasser einen günstigen Einfluß auf die Stickstoffbindung gehabt. Dagegen zeigt der Durchschnittsgewinn 

 an Stickstoff auf Tabelle 9 gegenüber dem von Tabelle 10 keinen so großen Unterschied, daß man daraus 

 einen Schluß ziehen könnte auf ein ungleiches Verhalten von Azotobader gegen Calciumcarbonat bei 

 Mannit und bei d-Glukose. 



Vergleicht man die Stickstoffgewinne auf Tabelle Nr. 7 mit denen auf Tabelle Nr. 8 bis 10, so 

 könnte man zu der Überzeugung gelangen, daß Azotobader in flüssigem Medium besser Stickstoff bindet 

 als auf festem. Man darf dabei doch nicht außer acht lassen, daß die Menge der Nährstoffe bei den 

 Kulturen der Tabelle 7 viel geringer ist als bei den übrigen. In der zweiten Kultur auf Tabelle 7 sind 

 bei 12,4 g Nährboden 2,0 mg Stickstoff gebunden worden; der Höchstbetrag bei den anderen Kulturen 

 betrug 2,7 mg bei 75 cbcm Kulturflüssigkeit. Danach sind durch Azotobader auf Agar 8,3 mg N auf 1 g 

 d-Glukose gebunden worden, dagegen in der flüssigen Kultur nur 1,8 mg N auf 1 g Mannit. Diese Zahlen, 

 das schnellere Wachstum auf Platten und das Aussehen der Zellen, die in flüssiger Kultur gewachsen sind, 

 lassen erkennen, daß die Stickstoffbindung in Plattenkulturen ausgiebiger ist als in flüssigen Kulturen. 



Um zu untersuchen, ob die Stickstoffverbindungen, die in der Luft des Laboratoriums vorhanden 

 sind, einen merkbaren Einfluß auf die Stickstoffbindungen haben, wurden 2 Versuchsreihen aufgestellt, von 

 denen die eine unter Glasglocken aufbewahrt wurde, zu denen nur durch konzentrierte Schwefelsäure und 

 Kalilauge gewaschene Luft Zutritt hatte, die andere auf gewöhnliche Weise aufgestellt wurde. Die Kultur- 

 flüssigkeit war bei beiden Reihen dieselbe; zu einem Teil der Kolben wurde eine Spur Ammoniumsulfat 

 zugesetzt, um eine größere Stickstoffzunahme zu erreichen. Bei Mischkulturen habe ich eine solche durch 

 diesen Zusatz nicht feststellen können, da hier die Begleitbakterien den Azotobader bald ganz unterdrückten. 

 Um die Luft unter den Glasglocken zu erneuern, wurde alle 8 Tage eine Stunde lang mit der Wasser- 

 strahlpumpe ein Luftstrom hindurchgesogen. Beimpft waren die Kolben mit Azotobactermaterial, das an- 

 scheinend rein war. Beim Abbrechen des Versuches zeigten sich leider die Kolben verunreinigt durch ein 

 kleines Stäbchen, den ständigen Begleiter von Azotobader. Da dieses sich aber in allen Kulturen fand, 

 so können die Resultate der Analysen dennoch Aufschluß über den Einfluß von gereinigter und nicht 

 gereinigter Luft auf die Stickstoffgewinne geben. 



Tabelle Nr. 16 enthält die Resultate der Analysen derjenigen Kulturen, zu denen die von Stickstoff- 

 verbindungen befreite Luft Zutritt hatte, Tabelle Nr. 15 von denen, die in der Luft des Laboratoriums 

 standen. Ein Vergleich dieser Resultate läßt einen durchgehenden Unterschied nicht erkennen. Bei der 

 gewöhnlichen Versuchsanordnung haben also die in der Luft vorhandenen Stickstoffverbindungen keinen 

 Einfluß auf die Resultate der Stickstoffbindung in den Kulturen. Zu demselben Ergebnis haben die unter 

 ähnlichen Bedingungen angestellten Versuche von Löhnis (1. c.) geführt. — Die Darbietung einer 

 Spur von Ammoniumsulfat hat bei diesen Versuchen die Stickstoffbindung gefördert, ohne daß Azotobader 

 von den Begleitbakterien unterdrückt wurde. Die mikroskopische Untersuchung nach Ablauf der Kulturzeit 

 ließ erkennen, daß dieser Spaltpilz sich stark vermehrt hatte, daß aber auch die Begleitbakterien zahlreich 

 vorhanden waren. Die Bildung einer Kahmhaut und das Dunkelwerden der Azotobacterkolonien bei 



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