12 E. Baur, Ueber zwei denitrificirende Bakterien aus der Ostsee. 4 



Einige sterilisirte Bouillonröhrchen mit dieser „Nitritbouillon" wurden durch je einen Tropfen 

 der genannten Kultur inficirt und richtig trat auch in den meisten Röhrchen nach etwa zwei 

 Tagen eine sehr starke Bakterienvegetation und eine deutliche Gasentwickelung auf. Die 

 Röhrchen schäumten etwa 6 — 10 Tage kräftig und gleichzeitig ging der Nitritgehalt stetig 

 zurück ; mit dem Aufhören der Gasentwickelung hörte auch die Blaufärbung der Kulturflüssigkeit 

 bei Diphenylaminschwefelsäurezusatz auf. Zweifelsohne war also in diesen Kulturen ein de- 

 nitrificirender Organismus vorhanden. 



Da von den meisten land- und süsswasserbewohnenden denitrificirenden Bakterien be- 

 kannt ist, dass sie nur in Gegenwart von gewissen Kohlenstoffverbindungen wachsen und 

 denitrificiren können, wurden gleichzeitig mit der oben genannten einfachen Nitritbouillon auch 

 Nährlösungen benutzt, denen Kartoffelstärke, Traubenzucker oder ameisensaures Natrium zu- 

 gesetzt war. Eine irgendwie kräftigere Denitrification trat hierin jedoch nicht ein, die Röhrchen 

 mit ameisensaurem Natrium zeigten sogar eine deutlich schwächere Schaumbildung und lang- 

 samere Denitrification. Weiterhin wurde daher zunächst ausschliesslich die einfache Nitrit- 

 bouillon benutzt. 



Die Isolirung des in allen diesen Kulturen vorhandenen denitrificirenden Mikroorganismus 

 machte anfangs sehr grosse Schwierigkeiten. Die Zahl der in den ersten Kulturen wachsenden 

 verschiedenen Bakterienspecies war, wie sich durch Gelatineplatten ') leicht feststellen Hess, noch 

 sehr gross. Doch gelang es durch mehrmals wiederholtes Ueberimpfen in frische sterile 

 Bouillon bald, diese Zahl auf 7 einzuengen, wenigstens wuchsen jetzt in den Platten nur noch 

 7 verschiedene Arten von Kolonien (als „a" — „g" bezeichnet). Von jeder von diesen Kolonien 

 aus wurden 3 Nitritbouillonröhrchen geimpft, etwaige Gasentwickelung und Nitritzerstörung in 

 3 von derselben Kolonie aus geimpften Röhrchen musste ergeben, welche von den 7 Arten 

 die gesuchte denitrificirende wäre. Wider alles Erwarten trat jedoch weder Schaumbildung 

 noch Denitrification in einem von diesen 21 Röhrchen auf, danach musste also entweder keine 

 von den 7 Species der gesuchte Organismus sein, oder aber derselbe war nicht im Stande in 

 Reinkultur in der Nitritbouillon zu wachsen und Nitrit zu zersetzen. Zunächst schien die erste 

 Vermuthung die wahrscheinlichste. In der Annahme, dass die gesuchte Species vielleicht in 

 den aerob angelegten Platten nicht habe wachsen können, wurden einige Plattenserien für 

 Anaerobenkultur unter H-Atmosphäre angelegt, aber auch in diesen wuchs keine andere Species 

 als in den früheren Platten, das gleiche galt für Platten, für welche Nitritagar^) verwendet 

 wurde. Nitritbouillonröhrchen, die von je einer von den sämmtlichen verschiedenen Kolonien 

 aus geimpft wurden, zeigten zwar meist deutliches Bakterienwachsthum, aber keine Denitrification. 

 Die zweite der oben aufgestellten Möglichkeiten, die Annahme, dass die gesuchte Species nicht 

 im Stande sei allein in Reinkultur zu denitrificiren, gewann also an Wahrscheinlichkeit. Sie 

 wurde zur Gewissheit durch einen glücklichen Zufall, schon ehe ich dazu kam, durch syste- 

 matische Kombinationsversuche die Sache klar zu legen. Auffälliger Weise zeigten nämlich 

 plötzlich einige von einer scheinbar ganz reinen isolirten Kolonie von „c" abgeimpfte Röhrchen 



1) Fischseewasser 100, Pepton 2, Gelatine 15. 



2) „ 100, „ 2, Agar 2, Kaliumnitrit 0,5. 



