Doby, Biochem. Untersuchungen über d. Blattrollkrankheit d. Kartoffel. 13 



Verhältnis beider zu verschaffen, wurde die Menge des Purpurogallins 

 einmal ohne, dann mit Wasserstoffsuperoxyd-Zusatz bestimmt. 

 Nachdem jedoch die Peroxydase ihre volle Wirkung nur im Vor- 

 handensein eines bestimmten Maximums von Wasserstoffsuperoxyd 

 ausübt,!^) hätte in einer Reihe von Parallelversuchen dessen äqui- 

 valente Menge ermittelt werden müssen, wodurch sich aber das 

 Arbeiten viel zu umständlich gestaltet hätte. Daher wählte ich 

 einen zwar weniger exakten, aber untereinander vergleichbare Re- 

 sultate liefernden Weg, indem ich das Wasserstoffsuperoxyd immer 

 in gleicher Konzentration (0,1 o/o) anwendete. 



Zur Bestimmung der Tyrosinase versuchte ich vor allem die 

 Anwendung des Titrationsverfahrens mittels Kaliumpermanganat, i'^) 

 mußte jedoch davon wegen der Oxydierbarkeit des Kartoffelaus- 

 zuges Abstand nehmen. Ich wendete mich also zu den optischen 

 Methoden und um die Anwendung einer Kontrollösung,^^) sowie die 

 weniger zweckmäßige spektrophotometrische Bestimmungsart^^) um- 

 gehen zu können, stellte ich Versuche mit dem König-Krüß sehen 

 Diaphanometeri9) an. Da nämlich eine dunkle Lösung desto undurch- 

 sichtiger erscheinen muß, je dunkler die Flüssigkeit ist, konnte 

 der Zahlenwert dieser Undurchsichtigkeit als Maß der Tyrosinase- 

 wirkung, welche eine Tyrosinlösung dunkel färbte, angesehen 

 werden.') In der Tat bewährte sich das Diaphanometer sehr gut 

 für diesen Zweck, zumal der aus den zu Ende der Reaktion tinten- 

 schwarzen Tyrosinlösungen sich ausscheidende, schwarze, melanin- 

 artige Niederschlag in den Zahlenwerten des Diaphanometers als 

 Trübungsgrad Ausdruck findet und dann auch noch die Konstru- 

 ierung der Reaktionsgeschwindigkeitskurve gestattet. Bezüglich 

 dieser Kurven muß ich hervorheben, daß sie typische Enzym- 

 reaktionen darstellen und den eigentümlichen Verlauf, den Fürt h 

 beim Gebrauch des Spektrophotometers feststellte, nicht im gering- 

 sten aufweisen. Die mittels des Diaphanometers erhaltenen „Licht- 

 durchlässigkeitsprozente" rechnete ich durch Abzug von 100 in 

 „Undurchsichtigkeitsprozente" um und zog von diesem Werte die 

 ursprünglichen Undurchsichtigkeitsprozente der Flüssigkeit ab, wo- 

 durch die Kurven untereinander vergleichbar wurden. 



Das Verfahren gestaltete sich also folgendermaßen: Der ge- 

 riebene Kartoffelbrei wurde rasch mit der vierfachen Menge Wasser 

 Übergossen, gut durchgeschüttelt und durch Asbesth gleich ab- 

 gesaugt. Diese hellbraune Flüssigkeit war die Enzymlösung. 



1. 40 ccm dieser Lösung (= 8 g Kartoffelbrei) auf 100 ccm 

 verdünnt, wurden zwecks Bestimmung der geringen, schwebenden 



') Auf ähnlichem Prinzii) beruht die spektrophotometrische Methode Fürths. 



