CULTURES DES ANAEROI'.IES. 



299 



Il est difficile de purger complètement d'oxygène un milieu de cul- 

 ture, surtout s'il est visqueux comme les gelées fondues. Heureusement, 

 beaucoup d'anaérobies supportent très bien la présence de petites quan- 

 tités d'oxygène; aussi leurs cultures s'obtiennent aisément. D'autres, au 

 contraire, ne peuvent se développer qu'en l'absence absolue de ce gaz; 

 ceux-là exigent une attention spéciale pour l'enlever totalement du 

 milieu. 



3° Méthodes basées sur la privation d'oxygène par V ébullilion du 

 milieu suivie de refroidissement à Cabri de l'air. — On peut se 

 servir de pipettes semblables à celles représentées figure 160, p. 318, dans 

 lesquelles on introduit par aspiration, jusqu'en haut, du bouillon sou- 

 mis quelques instants à l'ébullition ; on ferme l'extrémité inférieure à 

 la lampe, on ensemence aussitôt que le refroidissement est suffisant, 

 puis on ferme au chalumeau au-dessus de la bourre d'ouate. Après 

 développement on peut faire une prise en ouvrant à la lampe une des 

 extrémités effilées, avec précaution, pour donner issue aux gaz qui se 

 développent souvent dans ces cultures et font une légère pression, puis 

 en coupant le tube avec un trait de lime et une goutte de verre fondue 

 au rouge vif. 



Ou bien on fait bouillir quelques instants du bouillon contenu dans 

 un tube à essai et Ton verse de suite à sa surface une couche de quelques 

 centimètres d'huile ou de vaseline liquide stérilisées. Après refroidis- 

 sement, on ensemence dans le bouillon avec du liquide contenu dans 

 une pipette de verre très effilée, en ayant soin de ne pas en chasser tout 

 le liquide pour éviter le contact de l'air de la pipette avec le milieu. La 

 petite quantité d'oxygène qui peut être apportée par l'opération est 

 rapidement fixée par le milieu lui-même. Kasparek (1) propose une 

 petite modification qui peut rendre service. Il conseille l'emploi de 

 ballons de forme quelconque, qui portent près du col une petite 

 ampoule reliée par un court tube de faible diamètre, dans laquelle peut 

 se collecter, par une simple inclinaison, la majeure partie de la couche 

 protectrice d'huile ou de vaseline; il est alors beaucoup plus facile de 

 faire des prises du milieu pour l'étude après développement. 



Procédé recommandé. — Rosenthal (2) remplit des tubes de bouillon, 

 lait ou tout autre liquide, à la façon ordinaire, puis verse à la surface 

 une légère quantité de lanoline fondue sur une hauteur d'un demi- 

 centimètre environ; il stérilise à l'autoclave, un quart d'heure à 120°. 

 Après refroidissement, le liquide est emprisonné par le revêtement 

 solide de lanoline, qui empêche tout contact avec l'air. C'est ce qu'il 

 appelle un tube cacheté. Pour l'ensemencer, la couche de lanoline est 

 fondue par une légère exposition à une flamme de gaz (la lanoline 

 fond vers 42°) ; la matière d'ensemencement est introduite avec une 

 pipette effilée ou un fil de platine stérilisés. En utilisant des ballons 

 remplis de liquide jusque dans la partie inférieure du col et en y mettant 

 une couche de lanoline, il obtient le ballon cacheté. Tubes et ballons 

 cachetés, bien préparés, peuvent se conserver un ou deux mois prêts à 



(1) Kasparek. Ein einfach Luftabschluss flussiger Nahrboden beim kultivièren 

 anaërober Bakterien (Centralbl. fur linkt., XX, 1898, p. 536). 



(2) Rosenthal, Procédé extemporané de culture des microbes anaérobies en milieu 

 liquide : les tubes cachetés {Soc. île RioL, 18 octobre 1902). — L'aérobisation des 

 microbes anaérobies. Paris, Alcan, 1908. 



