CULTURES DES A.NAEROBIEÇ, 303 



l'Oxygène de l'air. Il faut aussi chercher à ensemencer aussi profon- 

 dément que possible, les couches inférieures étant toujours plus à l'abri 

 de l'oxygène. Le développement microbien fait souvent pâlir la couleur 

 bleue de la gelée au sulfo-indigotate, puis la décolore complètement, 

 l'indigo bleu passant par réduction à l'état d'indigo blanc. Ces gelées ne 

 doivent pas être préparées longtemps d'avance, la réduction se faisant 

 lentement à la température ordinaire. 



En somme, cette méthode de Liborius est basée sur l'élimination de 

 l'oxygène par l'ébullition préalable, puis l'addition de substances absor- 

 bantes, et l'emploi des milieux solides en couches profondes. Elle a 

 été perfectionnée et étendue par Veillon (1) qui en a fait un procédé 

 courant très commode pour la culture ou pour l'isolement des anaé- 

 robies. 



Procédé recommandé. — Veillon emploie la gélose nutritive glucosée 

 à 1,5 p. 100 ; la gélatine réussit d'ordinaire moins bien; le lactose 

 donne de moins beaux développements que le glucose. La gelée est 

 fondue, puis répartie dans des tubes de l cm ,5 à 2 centimètres 

 de largeur et 20 à 25 centimètres de longueur, sur une hauteur de 12 

 à 15 centimètres. Les tubes, bouchés à la ouate, sont mis pendant 

 vingt minutes à l'autoclave à 110°, puis sortis et aussitôt rapidement 

 refroidis à 40°. On prend de la matière à ensemencer, soit avec un fil de 

 platine, soit, mieux, lorsqu'elle est liquide, avec une pipette de verre 

 longue et mince, bien stérilisée d'avance; la quantité à prendre peut 

 varier suivant la richesse delà matière en microbes, ce que révèle un 

 examen microscopique préalable. La matière est déposée en plein 

 milieu. On agite pour bien répartir dans la masse. Avec une ou plusieurs 

 gouttes de ce premier tube, on fait une seconde dilution dans un 

 un tube n° 2, et avec autant de ce dernier, s'il est besoin, une troisième 

 dilution; et ainsi de suite pour des dilutions plus élevées, si le produit 

 est très riche en microbes. Il va sans dire qu'on peut aussi diluer 

 d'emblée ce produit avec un liquide stérilisé et ensemencer directement 

 ces dilutions. Les tubes ensemencés sont aussitôt plongés dans l'eau 

 froide pour une solidification rapide, puis mis à l'étuve vers 37°. Il faut 

 les examiner attentivement tous les jours; les colonies mettent souvent 

 une semaine pour apparaître. Si les dilutions sont suffisamment pous- 

 sées, les colonies qui apparaissent en temps voulu sont bien séparées 

 les unes des autres; les figures 149 à 154 représentent des cultures de 

 plusieurs microbes anaérobies faites dans ces conditions. 



Pour les isoler, les reporter en nouvelles cultures et en faire l'examen 

 microscopique, on peut se servir avantageusementd'une pipette longue- 

 ment étirée, dont on brise la pointe avec une pince flambée, que l'on 

 plonge dans la gelée jusqu'à la rencontre de la colonie. Par une légère 

 aspiration, on fait entrer cette dernière dans la pipette, en totalité ou en 

 partie; l'opération se fait au mieux en munissant la grosse extrémité 

 delà pipette d'un tube de caoutchouc un peu résistant de 30 à 40 cen- 

 timètres de long pour faciliter le maniement, comme le recommande 

 Guillemot (2). Avec le produit ainsi prélevé, on ensemence plusieurs 



(1) Veillon, Les miciobes anaérobies en pathologie (Congrès intern. de mèd., Paris, 

 1900). — Veillon et Zubeu, Recherches sur quelques microbes strictement anaérobies 

 et leur rôle en pathologie (,4rc/i. de méd. expér., juillet 1898). 



(2) Guillemot, Recherches sur la gangrène pulmonaire. Thèse de Paris, 1898. 



