M)\ TECHNIQUE BACTÉRIOLOGIQUE. 



nouveaux tubes de gélose dans la profondeur : la masse aspirée peut 

 être expulsée dans une boîte île Pétri stérilisée où se font alors des pré- 

 lèvements secondaires. On observe souvent un développement de colo- 

 nies dans toute la hauteur de la gélose. A la partie supérieure, ce 

 sont des aérobies qui existaient dans le mélange ; à partir de 3 à A cen- 

 timètres de profondeur, jusqu'en bas, ce sont exclusivement des 

 anaérobies. Lorsqu'il est difficile d'aller ainsi chercher des colonies de 

 la partie inférieure du tube, on peut, par un trait de lime et une perle de 

 verre au rouge vif ou du charbon Berzélius, séparer la partie inférieure 

 du tube et faire plus aisément le prélèvement. 



Il est malheureusement fréquent de voir les gaz, que développent 

 souvent les anaérobies, faire éclater la gélose, la disloquer en maints 

 endroits, en expulser même du tube; l'air rentre alors souvent en abon- 

 dance et vient arrêter le développement. 



On peut obtenir des cultures en bouillon glucose recouvert d'une 

 couche de vaseline liquide stérilisée ; le milieu est soumis aune ébullition 

 de quelques minutes ou placé à l'autoclave comme la gélose, refroidi 

 vers 35°, ensemencé et mis à l'étuve. Il en est de même pour le lait ou 

 d'autres milieux liquides, seuls ou additionnés de produits solides di- 

 vers, pomme de terre, papier, blanc d'œuf cuit, viande, etc. Cette 

 méthode de Veillon est certainement celle qui donne les meilleurs résul- 

 tats et est spécialement à recommander pour l'élude des anaérobies. Il 

 y a cependant une objection à faire dans l'emploi des milieux sucrés ; 

 beaucoup d'anaérobies produisent aux dépens des sucres des acides qui 

 peuvent, à un moment donné, entraver le développement ou gêner la pro- 

 duction desproduitsdiastasiquesou toxiques ; il est bon de s'en souvenir. 



Bûchner(l) a mis très heureusement à profit, pour cultiver les anaé- 

 robies, la propriété que possède le mélange d'acide pyrogallique et de 

 potasse d'absorber rapidement une forte proportion d'oxygène. A froid, 

 vers zéro degré, celte absorption est très lente ; à 20°, elle se fait bien. La 

 solution est versée dans une enceinte bienbouchéedans laquelle se place 

 le vase contenant le milieu de culture, fermé par un tampon d'ouate assez 

 lâche, sans qu'il puisse y avoir mélange naturellement. La figure 155 

 indique les dispositifs à prendre ;ces dispositifs varient suivant la gran- 

 deur et la forme des vases de cultures ; il est facile de les disposer dans 

 le sens voulu. La lessive alcaline n'est ajoutée qu'en dernier; il peut 

 même être préférable d'ajouter la potasse en morceaux, l'action se 

 faisant plus lentement, puis le vase externe est immédiatement bouché 

 et luté au suif ; la liqueur brunit très vite par suite de l'absorption de 

 l'oxygène. Pour un espace de 100 centimètres cubes à peu près, on 

 emploie 1 gramme d'acide pyrogallique que l'on dissout dans 10 centi- 

 mètres cubes d'eau et environ 10 centimètres cubes de lessive dépotasse 

 au dixième. Au bout d'un jour, il n'y a plus trace d'oxygène. Pour les 

 petites cultures, la figure 155 indique nettement comment il est possible 

 de procéder; le tube est placé dans un tube plus grand où l'on verse les 

 substances qui doivent réagir, l'acide pyrogallique d'abord, la potasse 

 en dernier lieu, immédiatement avant de boucherie vase extérieur avec 

 un bon bouchon de caoutchouc. 



(l) Bûchnbr, Eine neue Méthode zur Kultur anaërober Mikroorganismen (Centralbl. 

 fur Bakt., IV. L889). 



