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TECHNIQUE BACTERIOLOGIQUE. 



éviter l'apporl de germes de l'air. Une première coupe est faite perpen- 

 diculairement à la surface avec un scalpel encore brûlant ; elle doit 

 intéresser presque toute l'épaisseur de l'organe. A l'aide d'un autre 

 scalpel refroidi, on fait une seconde section perpendiculaire à la pre- 

 mière; une troisième coupe, faite avec un nouvel instrument dans un 

 autre sens, met à découvert des couches plus profondes ; on en fera 

 même une quatrième si c'est nécessaire. Chaque opération doit être exé- 

 cutée avec un couteau fraîchement stérilisé; il est à conseiller de n'em- 

 ployer jamais deux fois le même instrument. C'est dans la dernière 



section que l'on recueille, à 

 l'aide des aiguilles stérilisées, 

 la substance d'inoculation, qui 

 doit être introduite le plus ra- 

 pidement possible et avec les 

 plus grandes précautions dans 

 les milieux de culture disposés 

 à l'avance. 



Les couteaux rougis des 

 thermocautères sont d'un ex- 

 cellent usage pour pratiquer 

 les premières incisions ; on ne 

 doit jamais, cependant, pren- 

 dre de substance à inoculer 

 dans le voisinage immédiat 

 des sections faites à leur aide, 

 leur température élevée ayant 

 pu agir sur les germes qui 

 s'y trouvent. 



Dans les opérations précé- 

 dentes, nous avons admis que 

 la matière à inoculer ne ren- 

 fermait qu'une seule espèce 

 de Bactéries, celle dont on 

 veut obtenir une culture pure. 

 Pipettes. C'est le cas le plus simple. On 

 a fréquemment affaire à un 

 mélange d'espèces qu'il faut 

 alors isoler les unes des autres pour obtenir des cultures pures de 

 l'une d'entre elles ou de chacune d'elles. Diverses méthodes peuvent 

 conduire à les séparer. Le première en date est la méthode de dilution 

 dans les liquides imaginée par Naegeli (1), appliquée et perfectionnée 

 depuis par de nombreux observateurs, surtout Brefeld ('!) et Miquel(3). 

 Une faible parcelle de la substance à étudier est diluée avec soin dans 

 une quantité de liquide stérilisé, eau ou bouillon, telle qu'on puisse 

 être assuré qu'un volume déterminé de la dilution, goutte ou centimètre 

 cube, suivant le besoin, ne contienne qu'une seule Bactérie. Si l'on 

 veut examiner un liquide par exemple, une goutte prise avec une pipette 



(1) Naegeli, Untersuchungen ûber niederen Pilze, 1878. 



(2) Brefeld, Untersuchungen Liber die Spaltpilze, Bacillus subtilis. Berlin, 1878. 



(3) Miqubl, Les organismes vivants de l'atmosphère, Paris, 1882, et Annuaire de 

 lobscrv. de Monlsouris, 18M-1 891 . 



Fig 



160. — Pipettes et Fig. 161. 

 tubes à vaccin. 



