ENSEMENCEMENT DES CULTURES. 319 



stérilisée est mélangée à 50 ou 100 ou 500 centimètres cubes d'eau ou 

 de bouillon stérilisés. On ensemence avec une goutte de la dilution une 

 série de flacons, dont une partie doit rester stérile pour qu'on ait une 

 certitude suffisante d'avoir poussé assez loin la dilution. Dans le cas 

 contraire, il faut faire une seconde dilution avec une goutte de la pre- 

 mière et arriver parfois jusqu'à une troisième. Cette méthode, qui exige 

 une grande installation, puisqu'on est souvent obligé d'employer un 

 nombre considérable de ballons, de cinquante à cent et plus, a donné 

 d'excellents résultats entre les mains de Mi quel, pour le dénombrement 

 des Bactéries de l'air, des eaux ou des poussières. Elle a été aussi em- 

 ployée avec succès par Van Tieghem et Le Monnier(l) pour l'étude, en 

 cultures cellulaires, de Champignons plus élevés. 



On peutarriver à son but en faisant toute une série d'ensemencements 

 successifs, sur les mêmes milieux ou sur des milieux différents. Après 

 un certain nombre de cultures, une espèce prédomine souvent; on peut 

 facilement l'obtenir pure. 



En inoculant sur une grande longueur une très faible quantité de 

 matière à examiner sur un milieu solide, on obtient souvent le dévelop- 

 pement de colonies, bien isolées au début lorsqu'elles ne sont pas trop 

 nombreuses et que la substance d'ensemencement était en très minime 

 proportion. II suffit d'ensemencer chacune d'elles séparément. C'est un 

 procédé fort à recommander pour l'étude de liquides peu riches en 

 Bactéries, sang ou pus par exemple. On trempe un fil de platine, le plus 

 légèrement possible, dans le liquide, à examiner, et l'on fait à son aide 

 une ou plusieurs stries dïuoculation à la surface d'un tube de gélose ou 

 d'un petit cristallisoir à couvercle contenant delà gélose. Il est bon de 

 faire successivement plusieurs stries parallèles sans recharger l'aiguille. 

 De cette façon, si la substance est très riche en Bactéries, il pourra n'en 

 rester qu'un nombre très minime sur le fil de platine pour les derniers 

 traits d'inoculation; le premier ou les premiers ne donneront qu'un 

 amas confus de colonies peu isolables, tandis qu'elles seront nettement 

 séparées dans les derniers. 



Pour isoler une espèce, on peut soumettre le mélange à des influences 

 qui tuent les autres et auxquelles elle seule résiste. La chaleur est 

 l'agent le plus employé. Pour isoler le Vibrion septique, Pasteur recom- 

 mande (2) de traiter l'eau de lévigation des terres qui en contiennent 

 par une température de 00° maintenue quelques minutes. La chaleur 

 tue d'autres germes moins résistants et le liquide, injecté sous la peau 

 d'un lapin, détermine les accidents typiques causés parle développe- 

 ment dans l'organisme de cette seule espèce. iMiquel (3) a séparé le 

 Bacillus urese du Micrococcus ureœ dans l'urine putréfiée et les eaux 

 d égout, en chauffant le liquide pendant deux heures de 80° à 90°. Le 

 Micrococcus ureœ meurt à cette température que supporte très bien 

 la première espèce; le liquide ainsi traité, mis en culture, donne du 

 Bacillus urese pur. On utilise du reste couramment cette méthode 

 d'isolement pour obtenirje Bacillus sublilis. Les spores de cette espèce, 



(1) Van Tieghem et Lu Monmer, Recherches sur les Mucorinces [Ann. des se. n;tl., 

 Bot., 5« série, t. XVII, 1873). 



(2) Pasteur, Sur le Vibrion septique (Bail, de l'Acad. de mêd.. 1877). 



(3) Miquel, Nouvelles recherches sur le Bacillus ferment de L'urée Bull. Je la Soc. 

 chim., XXXII. !S7<>. p. 126). 



