FIXATION DES PRÉPARATIONS. 367 



qui troublent la préparation et cachent plus ou moins les Bactéries 

 qu'on y cherche. 



2° FIXATION PAR LA CHALEUR 



C'est surtout pour remédiera ces deux défauts et pourfaciliter l'action 

 des agents de coloration que Koch a dû modifier sa méthode. 11 a 

 été conduit à employercomme agent de Hxalion \a c haleur de 120° à 1 30°', 

 très vantée déjà par Ehrlich (1) dans ses études sur les éléments du 

 sang. Dans une série de recherches minutieuses, il a déterminé d'une 

 façon précise les conditions de l'opération et surtout la durée pendant 

 laquelle les préparations doivent subir l'action de la chaleur. Exposée 

 un temps trop court à cette température, la pellicule obtenue se dissocie 

 trop facilement au lavage; lorsque, au contraire, elle a été trop chauffée, 

 les éléments sont altérés, diftluent ou se ratatinent, et surtout perdent 

 l'importante propriété de fixer convenablement les matières colorantes. 



On obtient facilement la température voulue en usant de l'étuve à air, 

 réglée à 120°-130° au moyen d'un régulateur à mercure. On y arrive 

 également en chauffant au bec Bunsen une plaque métallique assez 

 épaisse; immédiatement au delà de l'endroit où une goutte d'eau pro- 

 jetée prend l'état sphéroïdal, la plaque a une température d'environ 120° 

 {calé faction). 



La goutte de liquide déposée sur la lamelle, comme précédemment, 

 est évaporée à une douce chaleur; puis le couvre-objet est placé, la 

 face chargée tournée vers le haut, dans l'étuve ou sur la plaque chauf- 

 fée. Le temps d'exposition à la chaleur varie avec le degré obtenu; la 

 préparation doit rester cinq minutes environ de 120° à 130°, et de dix à 

 quinze minutes à 11(K 



Les recherches de Koch (2) lui ont fait adopter un procédé infiniment 

 plus simple, pratique, tout en donnant d'aussi bons résultats. Il recom- 

 mande, pour opérer la fixation parfaite de la couche obtenue par dessic- 

 cation sur la lamelle, de passer trois fois dans la flamme d'un bec de 

 Bunsen brûlant à bleu le couvre-objet à traiter, la face sur laquelle se 

 trouve la couche de dessiccation tournée vers le haut. L'exécution de- 

 cette opération demande un peu d'habitude, qui s'acquiert du reste bien 

 vite en pratiquant. Le passage dans la flamme doit se faire avec une 

 certaine lenteur, comme si Von coupait du pain, disent les auteurs du 

 procédé. A défaut de gaz, on peut employer la flamme d'une forte 

 lampe à alcool. La réussite ou la non-réussite de certaines préparations 

 profiteront plus que toutes les indications. II faut naturellement avoir 

 soin de tourner vers le haut la face de la lamelle sur laquelle se trouve 

 la pellicule sèche, sans quoi les éléments atteints directement par la 

 flamme seraient très vite complètement désorganisés. Il en est de même 

 si la lamelle est soumise trop longtemps à la flamme et est conséquem- 

 ment portée à une température trop haute. Si l'on ne chauffe pas assez, 

 la couche se délitera trop facilement au lavage. En chauffant trop, on 

 peut modifier profondément le corps cellulaire; la membrane et le pro- 



(1) Ehrlich, Methodologische Beitriige zur Physiologie und Pathologie der verschie- 

 denen Formen der Leukocyten (Zeilschr. fur klin. !/<■</., I, p. 553). 



(2) Koch, Die Aetiologie der Tuberculose [Mitlh. uns dem kaiserl. Gesundheilsamte,. 

 I, 1887, p. 7). 



