368 PRÉPARATIONS ET ÉTUDE MICROSCOPIQUES. 



toplasma deviennent diftluents, ils perdent le pouvoir de fixer les cou- 

 leurs ; seules, les membranes très résistantes, celles des spores par 

 exemple, peuvent garder leur aspect normal, quoique modifiées aussi, 

 car elles se laissent imprégner par les solutions colorantes qui n'avaient 

 auparavant aucune action sur elles. Nous saurons utiliser cette particu- 

 larité en étudiant la coloration des spores. 



Voici, en résumé, quelle est la marche à suivre pour obtenir la fixation 

 convenable des Bactéries par ce procédé. Une goutte de liquide à exa- 

 miner est déposée sur une lamelle couvre-objet très propre. Lorsqu'on 

 a affaire à une substance visqueuse ou solide, des crachats ou une par- 

 celle de culture, on en délaye très peu sur la lamelle dans une gouttelette 

 d'eau pure, ou l'on écrase une petite portion entre deux lamelles qu'on 

 sépare en les frottant l'une contre l'autre, de manière à étaler la sub- 

 stance en couche assez mince. Dans ces différents cas, la lamelle est 

 soumise à la dessiccation à basse température, 40°-50°, soit sur une 

 plaque tiède, soit en la maintenant assez loin au-dessus d'une flamme, 

 à l'aide de pinces, à un niveau où la chaleur est douce. C'est seulement 

 lorsque l'évaporation est complète que la lamelle est lentement passée 

 dans la flamme, par trois fois, en ayant soin de ne mettre aucun temps 

 d'arrêt dans chaque opération. Elleeslalors suffisamment fixée; on peut 

 procéder sans crainte aux manipulations ultérieures, surtout faire agir 

 les réactifs colorants. 



Si l'on se sert d'une lame porte-objet au lieu de lamelle, il est néces- 

 saire de ralentir un peu le passage dans la flamme, le verre plus épais 

 transmettant moins vite le degré de chaleur nécessaire. 



Les Bactéries qui ont ainsi subi l'action d'une telle chaleur sont, il 

 faut en être prévenu, légèrement modifiées dans leurs formes et dans 

 leurs dimensions. Il se produit une rétraction, un raccourcissement des 

 éléments, peu important il est vrai, mais qui peut cependant être sensible 

 quand il s'agit de mensurations rigoureuses de quantités aussi petites. 

 Aussi doit-on poser en principe de ne jamais mesurer que les cellules 

 vivantes, dans leur état normal, lorsqu'il s'agit de fixer les caractères 

 d'une espèce et, ce qui résulte des mêmes considérations, de n'établir de 

 comparaisons rigoureuses qu'entre des préparations obtenues d'après la 

 même méthode. Il est même des espèces, le Spirille de la fièvre récur- 

 rente, par exemple, qui supportent très mal l'action de la chaleur; il faut 

 alors user de fixatifs chimiques. 



Ce moyen de fixation ne peut guère être employé que pour les liquides. 

 Userait difficile, en effet, d'y soumettre des morceaux de tissus, qui 

 s'altéreraient trop dans leur structure. Il faut, dans ce cas, recourir aux 

 réactifs chimiques, qui sont, par contre, d'un emploi moins général pour 

 fixer les Bactéries qui se trouvent dans les liquides. 



3- FIXATION PAR LES RÉACTIFS CHIMIQUES 



L'acide osmique, utilisé par Blanchard et Certes (1) pour l'étude 

 d'autres organismes inférieurs, peut servir dans les cas où la chaleur ne 

 rend pas la couche de dessiccation parfaitement adhérente à la lamelle, 



(1) Ci Rtes, Sur l'analyse micrographiquc des eaux (Assoc. franc, pour Vav. des se., 

 Congrès de la Rochelle, 1HH2, p. 777). 



