380 PRÉPARATIONS ET ÉTUDE MICROSCOPIQUES. 



minutes ou lentement. C'est le point un peu délicat de la méthode ; 

 souvent, pour bien réussir, il faut quelques tâtonnements. Le même 

 bain d'alcool peut servir assez longtemps, jusqu'à ce qu'il ait pris une 

 coloration bien marquée. 



Ce procédé expose moins que le précédent à une forte décoloration ; 

 de plus, il fournit des caractères de détermination précieux : certaines 

 espèces, se décolorant bien par son emploi, se distinguent par là d'autres 

 qui, traitées de la même façon, gardent la couleur. Dans une prépara- 

 tion où se trouvent des cellules, coupe d'organe ou lamelle préparée à 

 sec avec du sang ou du pus, les éléments ne gardent qu'une légère colo- 

 ration jaunâtre, tandis que les Bactéries sont fortement colorées en 

 violet noir lorsqu'on a usé d'un bain au violet ; il est du reste possible, 

 comme nous le verrons, d'user ensuite d'une double coloration. 



Ces particularités de coloration seraient dues aux acides gras qui se 

 trouvent dans les corps microbiens. Ces acides gras se colorent au 

 violet d'aniline à l'encontre des graisses neutres qui restent incolores ; 

 après l'action de l'iode, les acides gras non saturés gardent la couleur 3 

 tandis que les acides saturés supérieurs ne la gardent pas et la cèdent 

 au lavage à l'alcool (1). 



Méthode de Gram modifiée par Nicolle. — Nicolle (2) a modifié 

 avantageusement la méthode de Gram ainsi qu'il suit. Les lamelles, 

 fixées par le mélange d'alcool et d'éther, sont colorées à la solution de 

 thionine phéniquée (p. 377;. Au sortir du bain colorant, sans être lavées, 

 elles sont soumises à l'action d'une solution de Gram forte : 



Solution de Gram forte. 



Iode 1 gramme. 



Iodure de potassium 2 grammes. 



Eau distillée 200 — 



On les laisse dans la solution de quatre à six secondes, mais en la 

 renouvelant une ou deux fois. On décolore par Y alcool-acétone (alcool 

 absolu additionné d'un tiers d'acétone), qui décolore plus vite et plus 

 sûrement que l'alcool absolu. 



11 est possible alors de pratiquer une double coloration, avec l'éosine 

 par exemple; certaines Bactéries restent colorées en violet; d'autres, ou 

 des éléments cellulaires divers, ont pris la teinte rose. 



Cette méthode de Gram, simple ou modifiée, a une importance consi- 

 dérable en Bactériologie. C'est un élément de diagnostic important ; 

 les Bactéries qui prennent le Gram sont ainsi facilement différenciées 

 d'autres qui ne le prennent pas et qui peuvent leur ressembler beaucoup 

 comme formes, comme caractères de cultures et même comme réactions 

 à l'égard des colorants ordinaires. Voici la liste des principales espèces 

 dont il est important de connaître la façon de réagir lorsqu'on leur 

 applique cette méthode : 



il Guerbet, Maybb et Schaeffer,' Sur les réactions microchimiques des corps gras 

 et la réaction de Gram (C. H. Soc. de Biol., LXVIII, 1910, p. 353). 



(2) Nicolle, Pratique des colorations microbiennes (Ann. de l'Inst. Pasteur, IX, 

 1 -•>... p. 66 1 . 



