DOUBLE COLORATION. 387 



de la préparation, et la distinction des diverses espèces de Bactéries qui 

 s'y trouvent. De plus, quand il n'existe que de rares Bactéries ayant 

 gardé la première couleur employée, la mise au point s'opère avec bien 

 plus de facilité, chose qui n'est pas à dédaigner, on pourra s'en assurer. 



Koch s'est servi le premier d'une méthode de double coloration pour 

 distinguer les Bacilles de la tuberculose des autres espèces qui les 

 accompagnent toujours dans les crachats. Il a mis à profit cette obser- 

 vation, qu'il avait faite, qu'en plongeant une lamelle préparée, fortement 

 colorée au bleu de méthylène à l'aide d'une solution alcaline, dans un 

 bain de vésuvine, cette dernière couleur se substituait en partie à la 

 première, qui ne restait fixée que sur les Bactéries de la tuberculose. 



Il est plus sur de soumettre la préparation à un agent décolorant, en 

 opérant comme on l'a vu précédemment. Après action complète du 

 réactif, elle est lavée avec soin et mise dans le second bain, où elle ne 

 doit rester que peu de temps. La seconde coloration, coloration de fond, 

 gagne à être légère ; les éléments histologiques surtout doivent être 

 simplement teintés ; aussi faut-il surveiller de près 1 immersion, qui ne 

 doit durer que fort peu de temps, quelques secondes souvent si le bain 

 colorant est foncé. 



Pour répondre au mieux au but proposé, les couleurs à employer 

 doivent produire un contraste bien évident. Koch a employé le bleu et 

 le brun ; ils peuvent encore être utiles pour des cas spéciaux, comme 

 la photographie. On obtient de fort bonnes préparations en colorant 

 d'abord à la fuchsine et en se servant de bleu de méthylène comme 

 couleur de fond. On a souvent avantage à employer, comme colorants 

 diffus, le vert lumière [Lichtgrun FS), le violet acide (Saureviolett), la 

 .fuchsine acide (Fuchsine S ou Saiirerubin), ïorange G et particulière- 

 ment Véosine. 



Il ne faut prendre que Véosine soluble dans l'eau. C'est un colorant 

 des plus énergique et très pénétrant, mais qui ne possède pas la 

 moindre élection. Aussi fournit-elle de très beaux fonds rose rouge 

 sur lesquels les bleus et les violets se détachent admirablement. Les 

 mélanges de bleu de méthyle et d'éosine donnent souvent de belles 

 doubles colorations faisant voir nettement les ditïérences qui existent 

 dans le contenu cellulaire (1). 



La coloration de fond peut, du reste, varier suivant le désir de l'obser- 

 vateur ; elle s'obtient, pour les violets, avec l'éosine ou certains carmins 

 à coloration rouge ; pour la fuchsine, avec l'hématoxyline ou le bleu de 

 méthylène; pour le bleu de méthylène, avec l'éosine, la safranine, qui 

 donnent des teintes rosées. 



En faisant agir sur une même préparation plusieurs couleurs, soit 

 simultanément en employant une solution contenant un mélange de cou- 

 leurs différentes, deux ou plus, soit successivement en la soumettant à 

 l'action de deux ou plusieurs solutions de couleurs différentes employées 

 l'une après l'autre, on peut obtenir de très appréciables résultats. Les 

 corps microbiens, certaines de leurs inclusions, fixent parfois de préfé- 

 rencel'un des colorants employés, alors que l'autre teint le reste; on peut 

 obtenir de la sorte une coloration spécifique de la chromatine (Yoy. p. "26). 



(1) Zikmann, Eine méthode der Doppelfârbung bei Flagellaten, Pil/.e und Bakterien, 

 snwie einigen Amiiben (Ceniralbl. fur Bukt., XXIV, L898, p. 945). — Zetnow, Homa- 

 nowski's Fârbung bei Bakterien (Zeitschr. fur Hygiène, XXX, 1899, p. 1). • 



