390 PRÉPARATIONS ET ETUDE MICROSCOPIQUES. 



solutions hématoxyliques, celle de Delafield est à recommander. 



Hématoxyline de Delafield. 



A 400 grammes d'une solution saturée d'ammoniaque dans l'eau, on ajoute 



4 grammes d'hématoxyline cristallisée dissoute dans 25 centimètres cubes d'alcool 

 à 95°. On laisse le tout exposé à l'air et à la lumière pendant trois ou quatre jouis, 

 on filtre et l'on ajoute 100 centimètres cubes de glycérine et 100 centimètres cubes 

 d'alcool méthylique. On laisse au repos et, lorsque la solution est devenue très foncée, 

 on filtre et conserve dans des flacons bien bouchés. 



C'est un colorant très puissant qui doit être étendu d'une grande 

 quantité d'eau. Il colore les tissus en violet noir ou bleuâtre et est un 

 excellent colorant de fond avec la fuchsine. 



Les différentes solutions de carmin, dont on trouvera la préparation 

 en grands détails dans les ouvrages de technique microscopique (l) r 

 donnent d'excellentes colorations de coupes combinées avec le bleu de 

 méthylène ; la formule suivante est très recommandable : 



Carmin de Orth {carmin litliiné). 



Solution aqueuse saturée à froid de carbonate de litliiné Q. S. 



Carmin pulvérisé 2^ r ,50 



On ajoute avantageusement un dixième d'alcool à 95° (carmin de Orth 



alcoolisr . 



Méthode de Gram appliquée aux coupes. — On porte les coupes, 

 à l'aide d'une stapule,dans la solution d'iode, après les avoir colorées en 

 violet foncé dans un bain de violet de gentiane ou de thionine. On déco- 

 lore à fond par l'alcool absolu. Pour obtenir une coloration de fond, on 

 emploie alors un bain aqueux faible déosine, de brun de Bismarck, 

 d'hématoxyline, de carmin ou picrocarmin. 



Méthode de Nicolle-Gram. — Nicolle recommande un procédé de 

 triple coloration obtenue de la façon suivante : la coupe est débarrassée 

 de la paraffine à l'aide du xylol, puis mise dans l'alcool absolu pour 

 enlever le xylol. Elle est laissée un quart d'heure dans le carmin de 

 Orth alcoolisé. Laver à l'eau. Faire agir la solution de violet phéniqué 

 de quatre à six secondes en la renouvelant une ou deux fois. Décolorer 

 par l'alcool-acétone au tiers. Passer rapidement dans Yalcool pîcriqye 

 (alcool à 95° additionné d'une trace d'acide picrique, de façon à obtenir 

 une coloration jaune verdâtretrèspfde). Déshydrater par l'alcool absolu ; 

 xylol et baume de Canada. 



Méthode de Kùhne- Gram (2). — Les coupes se trouvant dans l'alcool, 

 sont portées dans un bain de bleu, obtenu en ajoutant une certaine 

 quantité de solution alcoolique concentrée à de l'eau phéniquée à 



5 p. 100 ou à une solution de carbonate d'ammoniaque à 1 p. 100. La 

 coloration demande un temps variable; elle est généralement bonne 



()) Voy. surtout Hom.es Lee et Henueguy, Traité des méthodes techniques de l'aiia- 

 tomie microscopique, 2 e «dit. Paris, Ooin, 1896. 



3 i h ih.ne, Recherche des Hactéries dans les tissus des animaux, traduit par II»rmann r 

 Paris, Carré, 1889. 



