4\2 MÉTHODES BIOLOGIQUES. 



. J50 microbes . , , 



>erum normal : ^ , = 1,3 de moyenne. 



100 leucocytes J 



, , . 400 microbes , , 



l« r sérum a examiner : — — = 4 de moyenne. 



100 leucocytes 



100 microbes 



2= sérum a examiner: — — =1 de moyenne. 



100 leucocytes 



les index opsoniques seront : 



Pour le l el sérum : -— = 2,666. 



1,5 



Pour le 2 e sérum : — = 0.660. 



Les objets nécessaires pour cette opération sont : un instrument pour 

 la prise du sang, lancette, aiguille, vaccinostyle, pipette effilée (Voy. 

 p. 313) ; quelques pipettes bien étirées, une étuve ou un petit bain- 

 raarie à 37°, une émulsion de leucocytes, une émulsion de microbes, du 

 sérum normal et du sérum à examiner ; en plus, de la solution physio- 

 logique solution normale : NaCl, 0,85 p. 100 d'eau distillée), des 

 colorants et ce qui est nécessaire pour l'examen microscopique. Quelques 

 détails sont nécessaires pour les éléments fondamentaux de la réaction, 

 leucocytes, microbes et sérums. 



Leucocytes. — On peut s'en procurer de différentes origines. 



< >n recueille l'exsudat péritonéal d'une grenouille, trois heures après 

 l'injection dans le péritoine de quelques centimètrescubesd'un mélangea 

 parties égales de bouillon et de solution physiologique. On centrifuge et on 

 lave deux fois, par centrifugation, le culot à la solution physiologique. 



On prélève, à la seringue stérilisée, de l'exsudat péritonéal d'un 

 cobaye, quatre ou cinq heures après l'injection dans le péritoine de 

 quelques centimètres cubes de bouillon, de solution physiologique, de 

 solution d'aleurone, de gélatine. On centrifuge; on lave deux fois le 

 culot à la solution physiologique, par centrifugation. 



Le mieux est de recourir aux leucocytes du sang humain. On s'adresse 

 à un homme sain, le plus souvent l'opérateur lui-même ou l'un de ses 

 aides. Le doigt est piqué comme il a été dit page 313. On laisse tomber 

 le sang goutte à goutte dans un petit tube contenant quelques centi- 

 mètres cubes d'une solution de citrate de soude à 1,5 p. 100 dans l'eau 

 physiologique, en évitant de faire tomber les gouttes sur les bords du 

 tube. On cherche à recueillir de la sorte environ 1 centimètre cube de 

 sang, et on agite fréquemment, mais doucement, pour bien mélanger. 

 Le mélange est centrifugé à une vitesse moyenne, pendant dix à quinze 

 minutes, dans un tube à fond effilé. On recueille la couche de leuco- 

 cytes avec le moins possible de globules rouges qui, plus denses, se 

 sont sédimentés au fond et restent assez adhérents, en inclinant le tube 

 et aspirant les leucocytes avec une pipette étirée munie d'une petite 

 boule de caoutchouc ; ces leucocytes sont portés dans un tube contenant 

 de la solution physiologique. Après une douce agitation, on centrifuge 

 une seconde fois. Le culot est lavé à nouveau à la solution physiologique; 

 il est fait une troisième centrifugation. L'amas de leucocytes est alors, 

 au moment du besoin, émulsionné dans une petite quantité de solution 

 physiologique, au moyen d'une simple agitation opérée doucement. 



On peut même opérer sur la totalité du culot obtenu après la première 

 centrifugation, en mélangeant soigneusement, pour chaque lavage et 



