41 i MÉTHODES BIOLOGIQUES. 



de 1 à 2 centimètres de l'extrémité. Le gros bout est muni d'une petite 

 tétine de compte-gouttes en caoutchouc. Le maniement se conçoit faci- 

 lement. On aspire d'abord de l'émulsion microbienne, bien agitée, jus- 

 qu'à l'index; puison introduit un peu d'air, sur une longueur d'un cen- 

 timètre à peu près; ensuite une quantité égale à la première, jusqu'à 

 l'index, de l'émulsion de leucocytes, suivie d'une bulle d'air à peu près 

 semblable à la précédente ; enfin, jusqu'à l'index aussi, du sérum à 

 employer. Il est à recommander d'opérer toujours exactement dans 

 l'ordre indiqué qui est le préférable. On mélange alors le tout, par une 

 série de projections et d'aspirations successives, sur un verre de montre 

 ou sur une lamelle; puis le tout est aspiré dans la queue de la pipette 

 que l'on ferme à la lampe et place dans l'étuve à 37°. On fait successi- 

 vement, absolument dans les mêmes conditions, une telle pipette en se 

 servant du sérum à examiner et une autre en se servant du sérum normal; 

 on les met à l'étuve en même temps. 



Les pipettes sont retirées après quinze ou vingt minutes. Successive- 

 ment, on en casse l'extrémité; le contenu est de nouveau bien mélangé 

 sur un verre de montre par quelques aspirations; on en fait alors des prépa- 

 rations. Une gouttelette est déposée sur un porte-objet, de préférence à 

 surface dépolie au papier d'émeri comme le recommande Wright, puis 

 bien étalée, au mieux en se servant d'une lame de verre à section très 

 nette. Les leucocytes seront plus nombreux à la fin de la partie étalée; 

 c'est là que la numération sera plus facile; mais il est nécessaire que 

 l'étalement soit suffisant pour n'en pas avoir, ou peu au moins, de 

 superposés. C'est un point délicat qui s'apprend vite à la pratique. On 

 sèche la préparation à l'air, fixe par la chaleur, l'alcool ou le sublimé, 

 colore suivant les indications, selon l'espèce microbienne à examiner. 

 On use le plus souvent de thionine ou de bleu. 



Pour le Bacille tuberculeux, la technique est plus compliquée : Wright 

 conseille de fixer pendant une minute à la solution saturée de sublimé, 

 colorer au Ziehl, décolorer à l'acide sulfurique à 2,5 p. 100, traiter par 

 l'acide acétique à 4 p. 100 pour détruire les globules rouges, laver et 

 donner une coloration de fond avec le bleu de Kiïhne. 



La préparation est examinée, on passe en revue 100 ou 150 leucocytes, 

 en notant pour chacun le nombre de microbes qu'ils renferment, ceux 

 qui n'en contiennent pas étant chiffrés 0; puison fait la moyenne. Cer- 

 tains leucocytes peuvent renfermer trop de microbes, qui devienniMil 

 impossibles à compter; c'est surtoutquand l'émulsion microbienne était 

 trop riche en microbes; si ces leucocytes sont peu nombreux, on fait 

 une numération approximative; Wright conseille même de les marquer 

 toujours 9 ou 10; s'ils sont nombreux, il faut recommencer l'opération 

 en usant d'une émulsion plus diluée. On réussit au mieux quand on ne 

 trouve que quelques microbes par leucocyte, 2 à 5 par exemple, au moins 

 pour l'opération qui porte sur le sérum normal. 



On établit facilement les numérations et les chiffres qui ont été indi- 

 qués précédemment (p. 112). 



Lorsqu'on veut utiliser les données fournies parcelle méthode, il est 

 bon de se souvenir qu'elle comporte des irrégularités et quelques causes 

 d'erreur dont la plus importante est la variation du nombre des 

 leucocytes chez des individus différents et aussi chez le même individu 

 suivant l'état du sany . 



