XIX. Fixioi-ungs- und Fiirbungsmittel für Pilze. 389 



Als bewährte Fixierungsmittel für Pilze lassen sich der Kaiser sehe 

 Sublimat-Eisessig (10 T. Sublimat, 3 T. Eisessig, 300 T. Wasser) oder 

 ein sehr verd. FLEMMiNGSches Gemisch (ca. 0,06 "/„ Osmiumsäure, 0,06 "/„ 

 Eisessig und 0,2 ö/„ Chromsäure in wässr. Lösung) empfehlen. Je nach der 

 Größe und Zartheit des Objekts muß die Fixierungsflüssigkeit 3 — 20 Std. 

 •einwirken. Besonders empfehlenswert ist das FLEMMiNCische Gemisch zur 

 Fixierung von Erysibaceen, das KAiSEKSche für fleischige Fruchtkörper, 

 wie etwa die der Helvellineen^). Das Auswaschen der FLEMMiKGSchen 

 Flüssigkeit hat durch fließendes Wasser, und zwar mindestens 24 Std. lang 

 zu geschehen. Das Sublimat läßt sich aus den mit .dem Kaiser sehen Ge- 

 misch fixierten Objekten mit 50-proz. Alkohol, den man in kurzen Zwischen- 

 räumen zu wechseln hat, entfernen. Sämtliches Material, auch das, welches 

 man nicht gleich verarbeiten kann, überführt man nach Entwässerung in 

 Paraffin, da ein längeres Aufbewahren in höherprozentigem Alkohol eine 

 gute Färbung der einzelnen Kernbestandteile beeinträchtigt. Die Einbettung 

 in Paraffin erfolgt am besten durch Vermittlung von Xylol-Paraffin, dessen 

 Temperatur ganz allmählich erhöht wird. Kleine Objekte bleiben in Xylol- 

 Paraffin und im Paraffin von 45 '^ Schmelzpunkt nur je 1 i/, — 3 Std. Darauf 

 erfolgt eine Überführung in Paraffin von 56 "^ Schmelzpunkt, nachdem das 

 Paraffin von 45 '^ Schmelzpunkt mit den Objekten im Wärmeschrank bis 

 zu jener Temperatur erwärmt worden ist. Es empfiehlt sich, die 5 — 7,5 jli 

 dicken Schnitte mit 50-proz. Alkohol bei ca. 32 '^ aufzukleben. Die Färbung 

 geschieht mit Eisen-Hämatoxylin und nachfolgender Rubin S.-Behandlung. 

 Man verfährt dabei folgendermaßen: Die Schnitte werden auf 1/2 — 12 Std. 

 in eine 2i/2-proz. Eisenammon-Alaunlösung und nach flüchtigem Abspülen 

 in Wasser für die gleiche Zeit in eine gereifte Hämatoxylinlösung gebracht. 

 Am besten benutzt man Weigert sches Hämatoxylin: 1 g Hämatoxylin in 

 10 ccm Alkohol gelöst und mit 90 ccm Wasser versetzt; diese Lösung 

 läßt man mindestens einen Monat in unverschlossener Flasche stehen und 

 verdünnt beim Gebrauch eine gewisse Menge davon mit dem gleichen 

 Volumen Wasser. Nach der Färbung erscheinen die Zellen ziemlich gleich- 

 mäßig blauschwarz. Mit der Eisensalzlösung wäscht man dann den Farb- 

 stoff vorsichtig aus, wobei sich nicht alle Zellen gleichmäßig entfärben, 

 .sondern gewisse Partien von Schläuchen völlig dunkel und undifferenziert 

 erscheinen, während in anderen Hyphen alle Teile fast vollständig entfärbt 

 sind. Beim weiteren Auswaschen hellen sich jedoch auch die dunklen 

 Hyphen auf, wobei sich Kerne in ihrem Innern erkennen lassen. Man 

 •differenziert so lange, bis alles Hämatoxylin aus dem Plasma verschwunden 

 ist. Diese dunkler erscheinenden Hyphen färben sich bei der nun folgenden 

 Tinktion mit einer wässr. Lösung von Rubin S. wiederum viel stärker, als 

 ■die übrigen. Es sind die Hyphen, welche später die Asci erzeugen. Die 

 geschilderte Art der Färbung macht es möglich, sie schon in sehr jungen 

 Stadien als solche zu erkennen. Um scharfe Kernfärbungen zu erhalten, 

 •differenziert man die mit Hämatoxylin überfärbten Schnitte so lange mit 

 der Eisensalzlösung, bis nur noch die Nukleolen blauschwarz erscheinen. 

 Dann läßt man eine wässr. Rubin S.-Lösung 5 Min. oder länger einwirken 

 und differenziert in schwachem Alkohol; das Chromatin tritt hierbei rot 

 gefärbt hervor. Fuchsin-Methj^grün (9 T. 0,1-proz. wässr. Methylgrün- 

 Jösung mit 1 T. konz. wässr. Fuclisinlösung) für 2 — 5 Min. auf die Schnitte 



') G. DiTTRiCH, COHNS Beitr. zur Biologie der Pflanzen, Bd. VIII, 1902, S. 25 ff. 



