524 XXIV. Saccharoniyces: Fixierung und Färbung. 



Kern in den lebenden Hefezellen g-ut beobachten, wenn man als Unter- 

 suchungsmaterial solche Hefe nimmt, die möglichst arm an Reservestoffen 

 und anderen Einschlüssen ist (Magerhefe), also etwa 14 Tage alte unter- 

 gärige Bierhefe, die 1 — 2 Tage bei 25 — 35° unter viel Wasser gelegen 

 hat. Auf diese läßt man sehr verdünnte Lösungen von Grentianaviolett oder 

 Methylenblau oder Methylviolett einwirken, wobei sich der Kern intensiv 

 färbt ^). Um Hefezellen noch eingehender studieren zu können, muß man 

 sie entsprechend härten und färben. Von den verschiedenen Mitteln, die 

 hierfür empfohlen werden 2), hat das MöLLEEsche^) Verfahren die meiste 

 Anwendung gefunden. Man stellt dabei eine Jodjodkaliumlösung aus 1 g 

 Jodkalium in 100 ccm Aq. dest. her und fügt Jod bis zur Sättigvxng 

 hinzu. Einige Tropfen dieser Lösung werden auf einen Objektträger ge- 

 bracht, mit einer Platinöse eine kleine Menge der zu untersuchenden Hefe 

 eingetragen und gleichmäßig, verteilt. Hiervon schöpft man nunmehr mit 

 der Platinöse und breitet die geschöpfte Masse so gleichmäßig wie möglich 

 auf einem Deckglas avis. Damit das gelinge, muß das Deckglas sehr rein, 

 vor allem völlig entfettet sein (s. Reg. IV Deckglas-Reinigung). So bereitet 

 man sich etwa ein Dutzend Deckgläser vor. Mit der zuvor hei'gestellten 

 Jodjodkaliumlösung wird jetzt eine Grlasdose gefüUt. In dem Augenblick, 

 wo die auf den Deckgläsern befindliche Flüssigkeit an der Luft verdunstet 

 ist, legt man die Deckgläser in die Glasdose, die mit einem Deckel ver- 

 schlossen wird. Dort haben die Deckgläser in der Jodjodkaliumlösung 

 mindestens 24 Std. zu verweilen. Dann spült man sie in Wasser ab und 

 läßt sie 30-proz., 8 0-proz. und endlich 95-proz. Alkohol passieren. Die 

 gelbe Jodfärbung muß dabei schwinden. Die Objekte bleiben in dem 95- 

 proz. Alkohol mindestens 2 Tage. Hierauf schreitet man zur Färbung. 

 Diese läßt sich gut mit einem Gemisch erreichen, das aus 4 g Fuchsin, 

 10 ccm Phenol, 40 ccm Alkohol und 200 ccm Aq. dest. besteht. Diese 

 Lösung erwärmt man in einem Uhrglas und taucht nun die Deckgläser 

 ein. Die Überfärbung beseitigt man durch Wasser, das einige Prozente 

 Schwefelsäure enthält. Schöne Präparate erhält man durch Nachbehandhxng 

 mit LöFFLEE scher Methylenblaulösung. Auch mit Heidenhain schem Eisen- 

 Hämatoxylin sind gute Färbungen zu erlangen. Man bringt zu diesem 

 Zweck die Deckgläser aus dem Alkohol für etwa 4 Std. in eine 2,5-proz. 

 Lösung von schwefelsaurem Eisenoxydammoniak, färbt dann 12 — 18 Std. 

 in Hämatoxylin (0,5 g Hämatoxylin, 100 ccm Wasser) und wäscht mit 

 Wasser gründlich aus. Hierauf werden die Präparate unter dem Mikroskop 

 mit der 2,5-proz. Lösung von schwefelsaurem Eisenoxydammoniak so lange 

 behandelt, bis der gewünschte Grad der Differenzierung eingetreten ist. 

 Diese Differenzierung vollzieht sich sehr rasch, verlangt somit sehr sorg- 

 fältige Überwachung. Die Untersuchung kann hierauf in verd. Glyzerin 

 (1 T. Glyzerin, 1 T. Wasser) vorgenommen werden, doch halten sich diese 

 Präparate nicht. Schon nach wenigen Tagen pflegen sie entfärbt zu sein. 

 Die Färbung hält sich länger in konz. Kaliazetatlösung oder in Zucker- 

 lösung (Sirupus Simplex der Apotheken), der man, um sie vor Schimmel- 



1) Vi^l. W. Hennf-BEEG, 1. c. 1912; ferner Derselbe, Zentralbl. f. Bakteriol. u. 

 Parasitenkunde, 2. Abt., Bd. XLIV, 1916, S. 10 ff . 



^) Eine kritische Zusammenstelluna darüber bei H. ZiKES, Zentralbl. f. Bakteriol. 

 usw., 2. Abt., Bd. XXXI, 1912, S. 507 ff . 



3) H. MÖLLEE, Zentralbl. f. Bakteriol., usw., 2. Abt., Bd. XII, 1892, S. 540, und 

 Bd. XIV, 1893, S. 359, sowie Fe. A. Janssens u. A. Leblanc in der Revue „La Cellule", 

 T. XIV, 1898, S. 206. 



