XXIV. Saccharomyces: Fixiorung, Färbung, Reinkultur. 525 



pilzen zu schützen, etwas Jodoform zusetzt. — Von anderer Seite ^) ist 

 auch zur Fixierung der Hefe eine gesätt. wässr. Subliniatlösung empfohlen 

 worden. Diese Lösung muß mindestens 12 8td. einwirken. Dann wäscht 

 man in Wasser aus, ersetzt dieses durch 30-proz. und durch 70-proz. 

 Alkohol, und hierauf letzteren durch Methyl-Alkohol. Einige Tropfen dieses 

 die Hefezellen führenden Methyl-Alkohols bringt man auf ein Deckglas, 

 läßt zum größten Teil verdunsten und fügt hierauf einige Tropfen Wasser 

 hinzu. Nachdem die Hefezellen sich mit Wasser sättigten, entfernt man 

 dieses und läßt die Hefe ganz trocken werden. Dann legt man das Deckglas 

 wieder für einige Std. in Wasser ein und färbt mit Fuchsin-Methjdgrün 

 oder Methylgrün-Eosin, oder auch Hämatoxylin. Ferner wurde eine Fixiex'ung 

 mit Pikrin-Osmium-Platinchlorid-Essigsäure (II. vom ßATHSches Gemisch, 

 s. Reg. IV) empfohlen ■•^), mit darauffolgender Färbung durch Heidenhain sches 

 Eisen-Hämatoxylin. Nach Auswaschen der Fixierungsflüssigkeit wird der 

 aufgeschwemmte Hefebrei in dünner Schicht auf Deckgläschen gestrichen 

 und auf diesen eingetrocknet. Dann läßt man die Deckgläschen in einer 

 Glasschale 6 — 24 Std. auf einer 2,5-proz. Eisenalaunlösung schwimmen. 

 Nach einmaligem Abspülen in Wasser trägt man sie in 0,5-proz. wässr. Häma- 

 toxylinlösung ein. Die nach 24-stündiger Einwirkung tiefschwarz gefärbten 

 Hefezellen werden unter mikroskopischer Kontrolle mit einer ^/^-proz. 

 Eisenalaunlösung differenziert, bis ein genügender Kontrast erzielt ist. Die 

 Untersuchung wird in unverd. Glyzerin vorgenommen, wo sich die Färbung 

 auch hält. — Schließlich gab Fixierung mit konz. wässr. Pikrinsäurelösung 

 und nachfolgende Färbung mit Methylenblau und Hämatoxylin oder besser 

 noch Pikroformol und Eisen-Hämatoxylin-Färbung bei der Differenzierung 

 des Zellkerns gute Resultate^). 



Die Reinkultur der Hefe hat eine sehr große, technische Bedeutung 

 gewonnen. Bei Bier- wie Weinbereitung arbeitet man jetzt meist mit 

 reiner Hefe. Die Methoden der Reinkultur sind für Hefe im wesentlichen 

 die nämlichen wie für Bakterien. Bewährt hat sich als fester, durchsich- 

 tiger Nährboden für die Kultur eine Nährgelatine, die durch Lösen von 

 5 — 6 T. Gelatine in gehopfter Bierwürze hergestellt wird '*). Man beschickt 

 ein Deckglas mit der infizierten Nährgelatine, kehrt es um, bedeckt damit 

 eine feuchte Kammer und stellt durch dii-ekte mikroskopische Beobachtung 

 fest, ob die in dem Nährboden sich entwickelnden Kolonien wirklich von 

 einer einzigen Zelle abstammen. Aus dem Habitus der Flecke ist bei der 

 Hefe, im Gegensatz zu den Bakterien, kein Schluß auf die Natur der Hefe 

 zu ziehen, da verschiedene Spezies dasselbe Aussehen, verschiedene Kolo- 

 nien derselben Spezies ein verschiedenes Aussehen zeigen können. Den 

 unter dem Mikroskop kontrollierten Kulturen werden mit geglühter Platinöse, 

 bzw. Öse aus Chromnickeldraht, die Hefezellen entnommen, mit denen 

 dann Kolben mit sterilisierter Würze oder anderer geeigneter Nährstoff- 

 lösung infiziert werden. Als passende Nährstofflösung erwies sich 10-proz. 



*) H. Wäger, Ann. of Bot., Bd. XII, 1898, S.5Ü8 ff. S. a. Derselbe imd A. Peni- 

 STON, Ebenda, Bd. XXIV, 1910, S. 51—55. 



«) C. Hoffmeister, Sitzber. d. Deutsch, nat.-med. Vereins f. Böhmen „Lotes", 

 1900, Nr. 5. 



^) A. GülLLIERMOND, Recherches cytologiques sur les leviires, Lyon, 1902; femer 

 Derselbe, Rev. g6n. de Bot., Bd. XV, 1903, S. 49, u. Bd. XVI, 1903/4, S. 3; femer 

 Ann. Mycolog., Bd. II, 1904, S. 184. 



*) E. Chr. Hansen, besonders in Meddelelser fra Carlsberg Labor., Bd. II, 188(5; 

 Bd. TU, 1891 u. 1892; Bd. V, 1902. 



