32 L. Michaelis. 



nehmen und diese analysieren. < )der man stellt eine iianze Iieilie gleich- 

 artiger Gemische von Ferment und Substrat her. unterbricht die Ferment- 

 wirkung der einzelnen Versuche zu verschiedenen Zeiten und analysiert 

 die einzelnen \'ersiiche. Als Beispiel für eine solche Methode sei die }'ol- 

 hardsche Methode ^ » zum \'erfolgen der Pepsinwirkung angeführt. 

 Die Fo//?r/>Y/sche Methode gestaltet sich folgendermalien : 



1. Herstellung der Kaseinlösung. 100^ Kasein wei'dcn in IZ Wasser 

 unter Schütteln eingeweicht, dann gibt man SO cm^ n-NaOH zu und füllt 

 auf "J / auf. ^lan erwärmt bis etwa 90", um das Kasein in Lösung zu 

 bringen, nach dem Abkühlen versetzt man mit etwas Toluol. Die Lösung 

 ist gut haltbar. 



2. ^'orbereitung zum Versuch. In einer langhalsigen Flasche, die mit 

 2 Marken bei ."iOO und 400 ciii-^ versehen ist, liU'it man zuerst zur Ansäuerung 

 genau 11 cw^ n-HCl-Lösung eiiifUeßen , füllt auf IbO cm^ auf und gibt 

 100 n;?.3 der Kaseinlösung zu. Dann wird auf 40*' erwärmt, eine gemessene 

 Menge der Pepsinlösung zugelassen und auf )]00 ein ^ aufgefüllt. Derartiger 

 Kolben stellt man eine ganze Pieihe auf und iintcibricht die \erdauung 

 zu verschiedenen Zeitpunkten. 



.■'). DurchfiUirung dei' Analyse. Die \'erdauung wird unterl)rochen. 

 indem 100 cm'^ 20''/oiger Xatriumsulfatlösung zugesetzt werden. Das un- 

 verdaute Kasein fällt dabei aus. Es wird abfiltriert und je 100 oder 200 an ^ 

 des Filtrats mit yL n-NaOIl gegen Phenolphtalein titriert. Von der Azidität 

 ist die vorher bestimmte Azidität der Kaseinlösung abzuziehen, sowie die 

 Azidität der Pepsinlösung. So erhält man den Zuwachs Ides Säuretiters. 

 der auf der Bildung der salzsauren Peptone beruht. Das ausfallende Kasein 

 hat nämlich die Eigenschaft, HCl zu binden: finden sich aber Peptone in der 

 Lösung, so tritt eine Konkurrenz zwischen dem Kasein und den Peptonen 

 um die Salzsäure ein, und es findet sich um so mehr HCl (als Pepton- 

 hydrochlorid) in Lösung, je mehr Pepton im Vergleich zum Kasein vor- 

 handen ist. ^lan kann so die Aziditätszunahmen als Maßstab für den Kasein- 

 abbau betrachten. 



Bei manchen physikalischen ^lethoden kann man jedoch den Fort- 

 gang der Pvcaktion an einer einzigen Probe verfolgen. Von den letzteren 

 seien einige erläuternde Beispiele genannt. 



1. Optische Methoden. Besteht die AVirkung des Ferments in einer 

 Änderung der Drehung der Ebene des polarisierten Liciites , so lälit sich 

 der Verlauf im Polarisationsapparat selbst verfolgen. So ist es bei der 

 Spaltung der Saccharose durch Invertase, bei der Spaltung der optisch 

 aktiven und der razemischen . asymmetrisch spaltbaren Polypeptide durch 

 Fermente. Die Beschreibung der dazu notwendigen Methoden der Polari- 

 sation vgl. Bd. L 



') Volhard , t^ber eine neue ^Methode der quantitativen Pepsiuljestimmung etc. 

 Münchener med. Wochenschr. 1903. S. 2129. 1907. Il^ii^. — Löhlein, Über die Volharchchc 

 Methode etc. Hofmeisters Beitr. Bd. 7. S. 120 (1905). 



