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die klare Flüssigkeit mit starkem Alkohol versetzt. Der Niederschlag setzt 

 sich leicht ab; durch Dekantieren läßt er sich von der darüber stehenden 

 Flüssigkeit leicht trennen. 



Der Rückstand wird nun auf ein kleines Faltenfilter gebracht, mit 

 Alkohol gewaschen und noch feucht auf porösen Porzellanschalen über 

 Schwefelsäure im Vakuum bei niederer Temperatur (nicht über 20'») rasch 

 getrocknet. 



Dieser trockene Rückstand löst sich vollkommen in Wasser, oxydiert 

 sich nicht an der Luft, enthält somit keinen ox\ dablen Körper (Tyrosin etc.). 

 Die Lösung enthält keine Lakkase, bläut also frische Guajakemulsion nicht, 

 wohl aber ist darin Peroxydase vorhanden, was durch Zusatz von Hydro- 

 peroxyd zur Guajakemulsion sich gleich zeigt. 



Lösungen von Tyrosinase in Wasser halten sich bei Zusatz von To- 

 luol ziemlich lang (mehrere Tage), aber die Wirkung nimmt langsam ab. 

 Es ist jedenfalls besser, die Lösung immer frisch zu bereiten. 



B. l'ilztyrosinase. Rekanntlich enthalten viele Pilze Lakkase und 

 Tyrosinase. Am bequemsten ist, Lactarius vellereus in Laul)\väldern zu 

 sammeln; dieser Pilz, der sehr leicht zu erkennen und in Mitteleui'opa der 

 größte und zugleich einer der verbreitetsten ist, ist kreideweiß, ziemUch zer- 

 brechlich, mit dicken Lamellen an der Unterseite des trichterförmigen Hutes 

 und gibt beim Anschneiden einen reichlichen weißen oder schwach gelblichen 

 Milchsaft, welcher scharf schmeckt. Von diesem Pilz können leicht 50 kg in 

 einem Nachmittag gesammelt werden. Die Pilze Averden so rasch wie möglich 

 zerstückelt, am besten mittelst einer Hackmaschine, wie sie gewöhnlich in 

 Küchen gebraucht wird. Die schleimige Masse wird stark gepreßt, der dunkle 

 Saft mit starkem Alkohol versetzt. Der reichliche Niederschlag wird auf einem 

 Tuch gesammelt und die Lösung abfiltriert. Der noch feuchte Niederschlag 

 wird hierauf mit Wasser versetzt und zwei Tage unter Zusatz von Toluol 

 digeriert. Die filtrierte Flüssigkeit wird nun wieder durch Alkohol gefällt, 

 der Niederschlag gewonnen und eventuell noch einmal gereinigt. Die Lakkase 

 ist durch diese Behandlung viel mehr abgeschwächt als die Tyrosinase. 



Man kann auch die rohe Fermentmasse auf Tonplatten rasch trocknen 

 und zur späteren Extraktion der Tyrosinase verwenden. Mit der Zeit ver- 

 schwindet die liakkase zum größten Teil und die Wasserextraktion der 

 rohen Oxydase liefert durch Zusatz von Alkohol ein sowohl von Lakkase 

 wie von Peroxydase freies Ferment, das die Reaktionen einer gereinigten 

 Tyrosinase hefert (siehe unten). 



Es werden von der Rohtyrosinase 50^ fein zerrieben und mit 500 r/ 

 W^asser 48 Stunden mazerieren gelassen, hierauf filtriert. Das Filtrat wird 

 mit 2 l 90" oigfni Alkohol versetzt, sehr kurze Zeit stehen gelassen, abdekan- 

 tiert und der Niederschlag in wenig Wasser gelöst und mit dem dreifachen 

 Volumen starken Alkohols versetzt. Der Niederschlag wird, wie oben, behandelt 

 und getrocknet. Er ist frei sowohl von Peroxydase wie von Lakkase (A). 



*) Cotte, Pr^sencc de la tyrosinase cliez Ic „Subcrites Domuncula" in Coniptes 

 rcndus Soc. Biolog. T. 55, p. 137 (1903). 



