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kale.szenziirad und lälit dadurch den Zusatz zu groljer Flüssigkeitsmcniicn 

 vermeiden. Man fügt solange Uranylacetat hinzu, bis sich grobe Flocken 

 l^ildon welche in kürzester Zeit sich abzusetzen beginnen, dekantiert und 

 filtriert. Der llückstand bleibt, nachdem er mit 0-2Voig<?i' Sodalüsung fein 

 verrieben ist, mindestens 12 Stunden stehen, worauf er filtriert wird. So 

 gewinnt man eine klare, eiweißarme Flüssigkeit, in welcher die Fermente 

 in wirksamer Form enthalten sind. Wünscht man i'einere Präparate, so 

 kann man Fällen und Ausziehen wiederholen. Zweckmäßigerweise setzt man 

 behufs Konservierung erst jetzt Toluol hinzu, da dessen Anwesenheit sonst 

 den \'erlauf der einzelnen Operationen zu sehr verlangsamt. Schnelligkeit 

 des Arbeitens ist nämlich Avegen der auch bei Zusatz antiseptischer Mittel 

 drohenden Fäulnis zu empfehlen. Ferner wird die Fermentausbeute desto 

 geringer, je später die Fnzyme aus dem Uranylacetatniedersclüag ausge- 

 zogen werden. 



Neuerdings hat in meinem Laboratoriuni Huta ' ) eine Methode der 

 Isolierung eines proteolytischen Leberfeimentes ausgearbeitet, die zunächst 

 nach folgenden Angaben ausgeführt wurde: 



Möglichst fein zerhackte Leber wird mit i)hysiologischer Kochsalz- 

 lösung (1 cm^ pro \ g) versetzt, gut geschüttelt und bleibt eine Nacht auf 

 Eis. Dann wird kollert und der Saft abgepreßt und nochmals filtriert. Das 

 Filtrat wird mit Chloroform im Eisschrank aufbewahrt. Die ganze Dar- 

 stellung bis zu diesem Punkt muß bei möglichst niedriger Temperatur er- 

 folgen. Geht man so vor, so erhält man bessere Ausbeuten und ebenso 

 wirksamen Saft, wie wenn man die Leber mit Qnarzsand und Kieselgur 

 verarbeitet. Dieses erste Extrakt ist trüb und sehr eiweißreich. 



Eine weitere "Reinigung läßt sich leicht folgendermaßen erreichen: Zu 

 einem Volumen des Extrakts fügt man '/lo Volumen Nornialsalzsäure. Man 

 wartet, ohne den entstehenden Niederschlag abzufiltrieren, eine Stunde und 

 fügt nun Sodalösung soviel hinzu, daß die Säure fast vollkommen neutrah- 

 siert ist. Dann wird filtriert. Man erhält so eine klare und proteolytisch 

 gut wirksame Flüssigkeit. 



Dieses Verfahren habe ich hier geschildert, weil die Kenntnis dieses 

 Vorgehens das Verständnis eines noch vorteilhaftei'en Verfahrens erleich- 

 tert, das ebenfalls Hata in meinem Laboratorium ausgearbeitet hat. 



100 g Pferdeleber werden in einer Keibschale tüchtig zerrieben und 

 dann mit 100 cm^ n/20-Salzsäure versetzt, die zugleich O'Söo/o Kochsalz 

 enthält. Man fügt 10 cm'^ Chloroform dem Cemisch zu. Nun überläßt man 

 das Gemisch sich selbst, schüttelt nur von Zeit zu Zeit durch. Braucht man 

 die Fermentlösung bald . so führt man den Versuch 24 Stunden bei ;i7" 

 durch. Ln anderen Falle belälit man das (iemisch 7 Tage bei Zimmer- 

 temperatur. Nach l^eendigung der Digestion wird durch Gaze isoliert, mit 

 Normal-Sodalösung neutrahsiert und filtriert. Man erhält dann ca. 125 cm» 



*) S. Hata, Zur Isolicruug der Leberferineutc, insbesoiiilero des gelatinolytischen 

 Leberfermentes. Biochem. Zeitschr. Bd. 16. S. 383— 390 (190i)). 



