Feststellung der ester(bzw. fett)spaltendeu Wirkung des Blutes etc. 305 



Flüssigkeit auf und schwenkt damit die Kapillare aus. Dann erst kann 

 die Kapillare mit der zu untersuchenden Flüssigkeit gefüllt werden. Am 

 bequemsten geschieht dies mit der Luftpumpe. Sorgt man dafür, daß die 

 Spitze der Kapillare während des Saugens in die Flüssigkeit taucht und 

 erst aus der Flüssigkeit genommen wird, wenn der Anschluß an die Luft- 

 pumpe aufgehoben ist, so vermeidet man sicher ein eventuelles Eindringen 

 von Luftblasen in die Kapillare. 



Die Kapillare muß sich stets in vollkommen vertikaler Stellung 

 während des Tropfens befinden. Man muß auch darauf achten, daß der 

 aus der Kapillare austretende Tropfen diese allseitig gleichmäßig gut 

 benutzt. 



Als Substrat für die Untersuchung auf Esterase (bzw. Lipase) ist 

 Tributyiin am häufigsten benutzt und ihre Anwendung zu dem vorliegenden 

 Zweck am eingehendsten geprüft worden. Von diesem Ester bereitet man 

 die gesättigte wässerige Lösung, indem man eine bestimmte Menge Wasser 

 mit überschüssigem Tributyrin versetzt und längere Zeit (etwa 1 — 2 Stunden) 

 nicht zu heftig im Schütte! appa rat schüttelt. Da das Tributyrin in Wasser 

 nm* äußerst schwer löslich ist, genügen schon wenige Tropfen, z. B. 10 auf 

 \000 cm^ Wasser, um einen hinreichenden Überschuß an Tributyrin zu 

 erzielen. Am besten benutzt man Mischungen, die 12 — 24 Stunden ge- 

 standen haben; Mischungen, die mehr als 2 — 3 Tage alt sind, sollen 

 nicht angewendet werden. Die Emulsion wird nun durch ein mit Wasser 

 befeuchtetes Filter filtriert (die ersten Teile des Filtrates werden ver- 

 worfen) und das klare Filtrat in einen (100 — 200 cm^ fassenden) Tropf- 

 trichter gefüllt. Eventuell durch das Filter gegangene kleine Estertropfen 

 sammeln sich an der Oberfläche der Flüssigkeit an; bei der Entnahme 

 der Flüssigkeit durch das lange Trichterrohr kann eine von ungelösten 

 Esterteilchen freie Lösung erhalten werden. 



Diese gesättigte wässerige Tributyrinlösung kann nun als Substrat 

 für die Esterspaltung dienen. Mit dieser Lösung wird die jeweilig benutzte 

 Tropf pipette in der Weise geeicht, daß man zunächst die Tropfenzahl 

 dieser gesättigten wässerigen Tributyrinlösung mit der Tropfpipette bei 

 einer bestimmten Temperatur (meist ca. 18") bestimmt. Dann stellt man 

 Mischungen aus 90 cm^ der Esterlösung mit 10 cm^ destilliertem Wasser, 

 weiterhin 80, 70, 60, 50 usw^ cm^ der Esterlösung mit bzw. 20, 30, 40, 50 usw. cm^ 

 destilhertem Wasser her und bestimmt für jede dieser Lösungen die 

 Tropfenzahl mit derselben Pipette bei derselben Temperatur. Trägt man 

 die erhaltenen Werte in ein Koordinatensystem, in welchem die Abszisse 

 die Konzentration der Lösung an Tributyrin angibt, wobei mit 100 die 

 gesättigte wässerige Lösung bezeichnet wird, während die Ordinate die 

 Tropfenzahl der angehörigen Tributyrinlösung (bei der betreffenden Tem- 

 peratur) angibt, so erhält man eine Kurve von der nebenstehenden Form 

 (Fig. 102), aus welcher für jede Tropfenzahl der prozentische Tributyringehalt 

 (auf die gesättigte wässerige Lösung bezogen) festgestellt werden kann. 



Abderhalden, Handbuch der biochemischen Arbeitsmethoden. VIII. ■^ü 



