Methodik der Stoffwechseluiitersuchung bei ^Mikroorganismen. 979 



Isolierung- von Knöllchenbakterien. 



Diese Bakterien wurden zuerst von Beijerinck ') auf einem Absud 

 von Papilionazeenblättern, Erbsen- oder Fabasteni^eln + V2V0 Rohrzucker 

 + 770 Gelatine in Reinkultur gewonnen. Die Kultur erfolgte auf Platten. 

 Man kann auch iVo Agar, P/o Maltose, OlVo KoHPO^, 0-02o/o MgSO^ 

 oder einen Bodenextrakt + 0'5"/o KaHPO^ + l^/o Mannit oder Glukose 

 + IV2V0 Agar verwenden. 



1 kg Erde wird mit 1 1 Wasser V2 Stunde bei 1 Atm. Überdruck im 

 Autoklaven oder mit 2 l Wasser 2 Stunden über freier Flamme erhitzt ; die 

 dann etwa 600 cni^ betragende Flüssigkeit gibt nach Vermischung mit 

 Talg beim Filtrieren durch festes Papier ein völlig klares Filtrat. Die Erd- 

 auszüge sind speziell zur Fortzüchtung kräftig stickstoffbindender Stämme 

 geeignet. 2) 



Als Impfmaterial verwendet man KnöUchen von Papilionazeenwurzeln in 

 frischem Zustande, die man zuerst 2 — 3 Minuten in eine desinfizierende Flüssig- 

 keit (Salzsäure spez. Gew. 1-20 2'5 cm^, Sublimat 1 g, Wasser 500 — 1000) 

 einlegt, dann flambiert und mit sterilen Instrumenten öffnet, um aus dem 

 Innern zur Infektion etwas Material zu entnehmen. Dieses vermischt man 

 auf die übliche Weise mit dem verflüssigten Agar oder der Gelatine und 

 gießt Platten, die man bei 20° C kultiviert, s) 



Isolierung von Azotobakter. 



Azotobakter wird angehäuft, indem man Leitungswasser mit 2''/o 

 ^lannit und 0-027o K., HPO^ in dünner Schicht mit Ol — 0-2 g Gartenerde 

 beimpft und bei 27 — 30° stehen läßt. *) Die Pieinkultur gelingt leicht auf 

 einem durch 2°/o Agar starrgemachten Mannitnährboden, auf dem der Pilz 

 kleisterartige Kolonien bildet. 



Isolierung von Clostridien. 



In Form eines Clostridiums wurde das erste stickstoffbindende Bakterium 

 isoliert. '■) Es mußte erst von zwei sich bei der Anhäufung gleichzeitig vor- 

 findenden Begleitbakterien getrennt werden. Seine Reinkultur kam nur im 

 Stickstoffstrom zur Bindung des Luftstickstoffs. Trotzdem die Frage, ob 



') Beijerinck, Die Bakterien der Papilionazeenknöllchen. Bot. Ztg. Bd. 46 (1888). 

 S. 763. 



-) \Yeitere Nährböden bei Löhnis, Handb. d. landwirtschaftl. Bakt. Berlin. Gebr. 

 Bornträger. 1910. S. 726. 



^) Harrison and Barlow, The nodule organism of the Leguminosae — its iso- 

 lation, cultivation. identification and commercial application. Zentralbl. f Bakt. II. Abt. 

 Bd. 19 (1907). S. 264. 



*) Beijerinck, Über oligouitrophile Mikroorganismen. Zentralbl. f. Bakt. II. Abt. 

 Bd. 7 (1901). S. ,561. 



^) Winogradsky, Recherches sur l'assimilation de l'azote libre de Fatmosphere 

 par les microbes. Arch. des Sciences biol. publ. par ITnstitut imp. de med. exper. ä 

 St. Petersbourg. T. 3. p. 297 (1895). 



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