980 Hans Pringslieim. 



diese anaerobe Form stickstoffbindender Clostridien mit der weit einfacher 

 zu isolierenden und zu kultivierenden fakultativ anaeroben Form identisch 

 ist, noch nicht mit völliaer Sicherheit entschieden ist^j. sei hier nur die 

 Gewinnung der letzteren Form wiedergegeben, da der Vergleich der 

 Spezialforschung überlassen werden muß. 



Man beimpft einen sterilen in AVasser untergetauchten Kartoffelkeil 

 mit Erde und erhitzt im Reagenzglas während 10 Minuten auf 80^. Bei 

 37"' inkubiert, setzt in kurzer Zeit eine energische Buttersäuregärung unter 

 Abgabe von Wasserstoff und Kohlensäure ein und man gelaugt zu einer 

 Buttersäurebakterienkultur, die man auf einem 5" o Traubenzucker ent- 

 haltenden Kartoff elabsud-Agar in eiuem der früher geschilderten Anaeroben- 

 apparate in Reinkultur gewinnen kann. — Die so isolierten Bakterien 

 sind im allgemeinen nicht dazu befähigt, stickstoffreie Nährlösung 

 gleich zu vergären. Man muß ihnen die verloren gegangene Fähigkeit zur 

 Stickstoffbindung wiedergeben. Zu diesem Zwecke beimpft man einen 

 mit der Wlnogradshjsclaen Nährlösung (2 — 4% Glukose. K2HPO4 O'OP o? 

 MgSO, O-050/o. Spuren von NaCl + Fe SO,, 20— 40^/ CaCOa) gefüllten Kolben, 

 die auf 1 I einen Zusatz von 0'002 g (NH4)2 SO4 erhalten hat . mit der 

 Reinkultur. Unter Ausnutzung der geringen Menge gebundenen Stickstoffs, 

 die zur Vergärung der gesamten Zuckermenge nicht ausreichten , tritt 

 Vergärung und Stickstoffbindung aus der Atmosphäre ein. Aus einer so 

 vorbereiteten Kultur kann man durch Überimpfen jetzt direkt stickstoff- 

 freie Nährlösung zur ^'ergärung bringen.-) 



Isolierung der Torula. 3) 



Der nicht gärende und keine Sporen bildende Sproßpilz wurde auf 

 den Blättern eines Lorbeerbäumchens gefunden. Wie häufig sein Vor- 

 kommen an dieser Fundstelle nachgewiesen werden konnte, wurde bisher 

 nicht angegeben. Die Blätter wurden mit Wasser geschüttelt und die Auf- 

 schwemmungsflüssigkeit zur Herstellung von Agarplatten verwandt. Dem 

 Agar war vorher durch oftmaliges Waschen mit Wasser sein Stickstoff 

 möglichst entzogen worden. 



Es wurde 2''/o Agar, 2" Glukose und 0"02Vo saures phosphorsaures 

 Kali zugegeben und bei 20 "^ kultiviert. Man kann die Torula so bequem 

 in Reinkulturen erhalten, und nach dem Tröpfchenverfahren auch Einzel- 

 zellkulturen anlegen. 



* 



Mit Hilfe der so isolierten Kulturen lassen sich nun sehr verschieden- 

 artige Untersuchungen über die Bedingung der Stickstoffassimilation an- 



') Vgl. //. Prinqsheim, Über die Identität stickstoffbindender Clostridien. Zentralbl. 

 f. Bakt. II. Abt. Bd. 24 (1909). S. 488. 



-) H. Pringsheim, Über ein stickstoffassimiliereudes Clostridium. Zentralbl. f. 

 Bakt. II. Abt. Bd. 16 (1906). S. 795. 



^) Heinrich Zickes, Über eine den Luftstickstoff assimilierende Hefe: Torula 

 Wiesneri. Sitzungsber. d. kais. Akad. Wien. Bd. 118. Abt. I (1909). 1. Juli. 



