Methodik der Stoffwechselimtersuchuug bei Mikroorganismen. 985 



Von großer Wichtigkeit für die in der Natur herrschenden Verhält- 

 nisse ist die Tatsache, daß dieselben Bakterienformen, die in Flüssigkeits- 

 kulturen beträchtliche ^Mengen freien Stickstoffs aus Nitrat entbinden, im 

 Boden, solange derselbe nicht allzu ^iel Wasser oder Energiematerial 

 enthält, den Salpeter zwar nach Maßgabe des vorhandenen Vorrats an 

 Energiematerial umsetzen, daraus aber Verbindungen bilden, die bei der 

 Gesamtstickstoffbestimmung wieder gefunden werden, i) 



3. Stickoxydulbilduug und Verbrauch.-) 



Die Bildung von Stickoxydul bei der Denitrifikation tritt in Er- 

 scheinung, wenn man in hochprozentiger Kaliumnitratlösung arbeitet. Man 

 füUt Stöpselflaschen ganz mit Fleischbouillon, welche mit S^/o Kalium- 

 nitrat versetzt ist, infiziert mit 10 — 20 g Gartenerde und kulti^dert bei 

 37°. Das Gasgemisch besteht dann aus Stickstoff, Kohlensäure und 

 Stickoxvdul. Letzteres kann bis 90''/o vorhanden sein, so daß ein glühen- 

 der Span, in die vorsichtig geöffnete Flasche gebracht, sich entzündet. Zur 

 Analyse fängt man die Gase am besten über gesättigter Chlorkalzium- 

 lösung auf. Auch Reinkulturen von denitrifizierenden Bakterien, z. B. von 

 B. pyocyaneus oder B. Stutzeri, bilden Stickoxydul. 



Die eben genannten Bakterienarten vermögen das Stickoxydul auch 

 weiter in Reinkultur zu zerlegen. Es entsteht hierbei aus Stickoxydul 

 2 N, + C =: 2 No 4- 00-2 unter Volumenvermehrung 1 V2 Volumen Stickstoff 

 und Kohlensäure. Die Folge davon ist Druckerhöhung bei Kultur im ge- 

 schlossenen Kolben. Für die Versuche eignet sich eine Nährlösung der 

 Zusammensetzung 100 Leitungswasser, 0-5 Asparagin und 0"05 K.2HPO4. 

 von der 50 crn^ in einen mit Gashahn verschließbaren Stehkolben gebracht 

 werden, in dem die Luft durch Stickoxydul (bereitet aus salzsaui-em Hydro- 

 xylamin und Kaliumnitrit) verdrängt wird. Nach etwa einer Woche ist 

 das Stickoxydul bei 37° in Stickstoff und Kohlensäure umgewandelt. Auch 

 soll das Stickoxydul z.B. für B. Stutzeri gleichzeitig Stickstoff- und Sauer- 

 stoffquelle sein können, wenn die Nährflüssigkeit keine Stickstoffnahrung 

 enthält. 



Weiterhin kann Stickoxydul mit Wasserstoff unter dem Einfluß von 

 Bakterien vereinigt werden, die hierbei unter Verbrauch der in der Nähr- 

 flüssigkeit gebotenen Kohlensäure eine Chemisynthese vollziehen. Hierbei 

 findet Volumenverminderung (N., + H2 = H, -f N2 ) bis auf die Hälfte 

 statt. Um diesen Vorgang einzuleiten, bedient man sich des Kulturappa- 

 rates von Söhngen (vgl. S. 978), den man mit 100 Leitungswasser, 0*02 

 K2HPO4, 002 NH.Cl und Ol NaHCO, anfüllt. Man verdrängt dann die 

 Hauptmenge der Nährflüssigkeit durch Einleiten einer Mischung von Stick- 

 oxydul und Wasserstoff in gleichem Verhältnis. Nach 10 Tagen ver- 



') Ä. Koch und H.Petit, Über den verschiedenen Verlauf der Denitrifikation im 

 Boden und in Flüssigkeiten. Zentralbl. f. Bakt. II. Abt. Bd. 26 (1910). S. 335. 



2) Beijerinck und Minkmann, Zentralbl. f. Bakteriol. II. Abt. Bd. 25 (1910). S. 30. 



