1014 Donald D. van Slyke. 



gemeinen sind für eine befriedigende Durchführung 2o bis 3 g erforder- 

 lich und falls eine genügende Menge Material zur Verfügung steht, so ist 

 es sehr empfehlenswert, die Analyse doppelt auszuführen, also 6^ zu 

 gebrauchen. Das Protein wird in 10 oder 20 Teilen 20Voigei' Salzsäure gelöst 

 und in einem tarierten Kolben am Rückflußkühler gekocht. Nach Verlauf 

 von 8 oder 10 Stunden wird die Hydrolyse unterbrochen, die Lösung ge- 

 kühlt, und dann werden Portionen von 1 oder 2 cm^ (die etwa Ol g Protein ent- 

 sprechen) mittelst einer empfindlichen Pipette entnommen. Die Proben werden 

 auf 10 cm^ verdünnt und dann zur Bestimmung des Aminostickstoffs benutzt. 

 Die verschiedenen Bestimmungen sollen alle unter gleichen Bedingungen 

 ausgeführt werden, da sonst durch das Ammoniak des Amidstickstoffs 

 Irrtümer entstehen könnten. Für gewöhnlich erhält man die zufrieden- 

 stellendsten Resultate bei Ausführung der Bestimmungen in 6 Minuten, 

 und zwar so, daß die Mischung von hydrolysiertem Eiweiß und salpetriger 

 Säure 5 Minuten stehen bleibt und darauf eine Minute lang geschüttelt 

 wird. Unter solchen Bedingungen, bei denen eine konstante Zimmertempe- 

 ratur anzunehmen ist, wird in jedem Falle die gleiche Menge Ammoniak 

 (lö^/obei 20") zersetzt. Nachdem man dem Hydrolysengemisch die Probe für 

 die Aminostickstolfbestimmung entnommen hat, wird der Kolben samt 

 der zurückbleibenden Hydrolysenflüssigkeit gewogen, dann kocht man wieder 

 8 — 10 Stunden und wiegt nochmals, ehe die nächste Probe genommen 

 wird. Durch diese Gewichtsbestimmungen stellt man die etwa durch Ver- 

 dampfung entstandene Veränderung der Konzentration der Lösung fest. 

 Falls eine Konzentration vor sich gegangen ist, so muß man eine Korrektur 

 für die Volumverminderung in Prozenten anbringen. — Die Hydrolyse 

 wird solange fortgesetzt, bis die Probebestimmungen einen konstanten 

 Aminostickstoffgehalt ergeben. Dies AAird gewöhnlich nach über 24 Stunden 

 erreicht sein. Es ist unbedingt erforderlich, die Vollständigkeit der Hydro- 

 lyse (mittelst fder Aminobestimmungen ) zu kontrollieren , da sonst , wie 

 Osborne kürzUch gezeigt hat, auf Grund unvollständiger Hydrolyse Fehler- 

 quellen resultieren. 



Bestimmung des Ammoniaks (Amid-Stickstoff). Die Be- 

 stimmung des Ammoniaks, das bei der Säurehydrolyse aus Eiweiß ent- 

 steht, verdient besondere Beachtung, seitdem Osborne^ Leavenworth und 

 Brautlecht gezeigt haben, daß der Ammoniakstickstoff gewöhnlich gleich 

 ist dem der Dicarbonsäuren, Glutaminsäure und Asparaginsäure, mit denen 

 er ursprünglich im Eiweißmolekül in Form von Säureamid-Radikalen ge- 

 bunden anzusehen ist. i) 



Damit die nachfolgenden Bestimmungen in keiner Weise durch 

 noch vorhandenes Ammoniak beeinflußt werden, ist es unbedingt nötig, 

 bei der Bestimmung des Ammoniaks jede Spur von Ammoniak zu entfernen. 

 Die Behandlung mit Alkali muß man dabei aber so vorsichtig ausführen, 



*) Oshorne, Leavenworth und Brauf/echt ^ Diffcreiit Forms of Strogen in Proteins. 

 Amcric. Journ. of Biolog. 23. 194 (1908). 



