Die Methoden der biologischen Mikrochemie. 1107 



Berlinerblau-Reaktion auf, während hingegen an den eisenfreien Stellen 

 der Schnitte nicht die geringste Farbreaktion zu bemerken ist. 



Wenn das Material mit irgend einer Halhchen Flüssigkeit gehärtet 

 wurde, ist das vorhandene, anorganische Eisen als Ferrosnlfid fixiert. In 

 Schnitten derartiger Präparate verblaßt die anfänglich dunkelgrüne Färbung 

 dieser Verbindiiiig bald mehr oder weniger. Man muß sie deshalb mit 

 verdünnter Ammonium sulfidlösung behandeln, wodurch die Reaktion deut- 

 hch erkennbar gemacht wird (1 Teil Ammoniumsulfidlösung und 2 Teile 

 Wasser). Dann wird mit destilliertem Wasser gewaschen und 30 Minuten 

 lang in einer Mischung gleicher Volumina O'ö^/oiger Salzsäurelösung und 

 einer l/ö'^/oigen Ferrocyankaliumlösung aufbewahrt. Hierauf wird gut mit 

 Wasser gewaschen, mit Xylol geklärt und dann in Kanadabalsam einge- 

 bettet. Das vorhandene Eisen wird als blaue Verbindung, die in jeder 

 Hinsicht dem Berlinerblau gleicht, nachgewiesen. 



Gerade wie in den Hämatoxylinpräparaten kann man auch bei den 

 Berlinerblauproben eine Kontrastfärbung hervorrufen. Zu diesem Zwecke 

 werden die Schnitte unmittelbar, nachdem sie zur Entfernung der Säure- 

 Ferrocyanidmischung gewaschen worden sind, 30 Minuten lang in eine 

 Lösung von Safranin (P/o in 30% Alkohol) gelegt. Hierauf wird einige 

 Male mit Alkohol gewaschen, vollständig mit absolutem Alkohol entwässert, 

 dann mit Xylol geklärt und in Balsam eingebettet. Die rote Färbung des 

 Safranins steht im augenfälligen Gegensatz zu der Berlinerblau-Eisen- 

 reaktion. Die Berlinerblaufärbung solcher Eisenpräparate neigt zum Ver- 

 blassen. Man kann diesen Vorgang bedeutend einschränken, indem man 

 die Schnitte im Dunkeln aufbewahrt. Helles Sonnenlicht vermag die 

 Berlinerblauprobe in wenigen Wochen gänzhch zu bleichen. 



Vorübergehend haltbare Präparate können gewonnen werden, indem 

 man die frisch aus dem Alkohol entnommenen Schnitte behandelt und sie 

 auf den Objektträger in einer Mischung gleicher Teile Ammoniumsulfids 

 und Glyzerins einlegt. Das Eisen wird so als ein dunkelgrüner durch die 

 Struktur des Schnittes hindurchschimmernder Fleck nachgewiesen. 



Sowohl bei dieser Methode, als auch bei der, bei welcher das Eisen 

 mit der Berlinerblaureaktion nachgewiesen wird, läuft man Gefahr, die 

 leichter angreifbaren organischen Eisenverbindungen, welche spurenweise 

 in den Schnitten vorhanden sind, mit einzuschließen. Ammoniumsulfid 

 macht das Eisen aus einer so beständigen organischen Verbindung wie 

 Vitellin des Eidotters schneller frei als Ferrosnlfid, und man muß daher 

 darauf bedacht sein, daß in solchen Präparaten, besonders in denjenigen 

 der Duodenalschleimhaut von Tieren (Meerschweinchen und Kaninchen), die 

 mit Eisensalzen gefüttert wurden, bei Anwendung dieses Reagenzes mehr 

 Eisen nachgewiesen wird, als wenn man die direkt aus dem Alkohol ent- 

 nommenen Schnitte nur mit reiner, wässeriger Hämatoxyünlösung be- 

 handelt. Bei solchen organischen Verbindungen setzt auch die Salzsäure 

 des Säure-Ferrocyanidreagenzes das Eisen in Freiheit und infolgedessen 

 kann mittelst der Berhnerblaureaktion ebenfalls mehr Eisen angezeigt 



