Die Methoden der Inologischen Mikrochemie. 1111 



gegossen, und es wird wieder absoluter Alkohol zugesetzt. Nach nochmals 

 24 Stunden wird der überstehende Alkohol abgegossen und durch frischen 

 absoluten iVlkohol ersetzt. Diesen läßt man nun zwei Tage lang einwirken. 

 Die gehärteten Organismen werden jetzt mit einer Pipette, und zwar mit 

 einer möglichst geringen Menge Alkohol aufgenommen und tropfenweise 

 auf den Objektträger gebracht. Nachdem der Alkohol zum größten Teil 

 verdunstet ist, fügt man das Sulfidreagens und das Glyzerin hinzu, bedeckt 

 mit einem Deckgiä sehen und bringt nun das Präparat in einen auf 60^ 

 erwärmten Trockenkasteu, damit die Pieaktion mit dem organischen Eisen 

 eintreten kann. Hierzu sind Tage erforderlich. Um das Maximum der Re- 

 aktion zu erreichen, können selbst zwei Wochen vergehen. 



Bei größeren Organismen kann die Entwicklung der Pteaktion auf 

 organisches Eisen viel längere Zeit in Anspruch nehmen, als es bei kleineren 

 Organismen der Fall ist. Dies beruht auf dem geringeren Eindringungsver- 

 mögen des Pieagens. Bei homogenen Membranen wird die Diffusion in den 

 gehärteten Organismus verhindert und die Reaktion tritt überhaupt nicht 

 ein. Dies letztere ist der Fall bei Vaucheriapräparaten und häufig bei 

 Cladophora- und Spirogyrapräparaten. "Wenn jedoch die Kerne und 

 andere eisenhaltige Teile des Zytoplasmas in diesen Präparaten aus der 

 einscWießenden Membran, durch Bruch derselben, in Freiheit gesetzt werden, 

 wird die Reaktion ohne Sch^inerigkeit oder ohne besonderen Aufschub 

 erhalten. 



Zuweilen ist es vorteilhaft, das organische Eisen in Schnitten (von 

 5—10 [j- Dicke) des alkoholgehärteten Gewebes im ganzen nachzuweisen. 

 Zu diesem Zwecke werden die Schnitte 1—4 Tage lang in schwefelsäure- 

 haltigem Alkohol, der aus 4 Vol. reiner konzentrierter Schwefelsäure (spez. 

 Gew. 1-84) und 100 Vol. absolutem Alkohol besteht, gelegt. Die mit Glas- 

 stopfen verschließbare Flasche, in der Flüssigkeit und Schnitte aufbe^Yahrt 

 werden, muß natürüch vorher zur Entfernung jeder Spur von Eisen 

 sorgfältig gereinigt werden. Die Temperatur während des Härtungspro- 

 zesses soll andauernd o5--40o C betragen. Die Säure setzt das Eisen lang- 

 sam aus den vorhandenen, organischen Verbindungen in Freiheit. Der 

 Säurealkohol extrahiert das Eisen aus den Schnitten allerdings langsamer, 

 als es in Freiheit gesetzt wird. Am Ende des zweiten Tages hat die Re- 

 aktion gewöhnlich ihr Maximum erreicht, und die Schnitte können jetzt 

 nach der einen oder der anderen Weise zum Nachweis des in Freiheit 

 gesetzten Eisens behandelt werden. Nach dem einen Verfahren werden die 

 Schnitte mit absolutem Alkohol gewaschen, am jede Spur Säure zu ent- 

 fernen, dann 24 Stunden lang in einer O^öo/oigen Hämatoxyhnlösung be- 

 lassen, hierauf mit Alkohol entwässert, mit Xylol geklärt und in Balsam 

 eingebettet. Nach dem anderen Prozeß bringt man die Schnitte sofort für 

 eine halbe Stunde lang in eine frisch bereitete Mischung gleicher Volumina 

 0"ö"/oiger Salzsäure und Vb^/o^ger Ferrocyankaliumlösung . wäscht sie 

 darauf sorgiültig mit destilliertem Wasser, färbt sie mit Eosin, entwässert 

 und bettet dann in beschriebener Weise ein. Die Kontrastfärbung mittelst 



