Darstellung- der Proteine der Tierwelt: Nicht kristallisierbare Proteine. 365 



Das filtrierte, stark alkalisch reagierende Pferdeblutplasma wird 

 (frühestens o — 4 Stunden nach der Blutentnahme) vollständig mit kalk- 

 freiem Kochsalz gesättigt. Das hierbei ausfallende Globulin- und Fibri- 

 nogengemisch steigt an die Oberfläche und wird abfiltriert. Es wird als- 

 dann in wenig 5"/oiger Kochsalzlösung gelöst und mit dem gleichen Vo- 

 lumen gesättigter Kochsalzlösung versetzt (Halbsättigung). Der entstehende 

 Niederschlag besteht aus Rohfibrinogen. Heubner empfiehlt bei der Halb- 

 sättigung eine strenge Kontrolle des Salzgehaltes mit Hilfe des Aräometers 

 vorzunehmen, um einen Überschuß von Kochsalz zu vermeiden. Ein zu 

 Wenig an fällendem Salz ist unschädüch. Der Niederschlag wird dekantiert, 

 filtriert und mit Filtrierpapier abgepreßt, alsdann in einer 5 — 8 "/o igen 

 Kochsalzlösung gelöst und durch Halbsättigung mit Kochsalz erneut ge- 

 fällt. Diese Umfällung wird o — 4mal in gleicher Weise wiederholt, so 

 daß das Filtrat der letzten Fällung nahezu eiweißfrei ist. 



Die zuletzt gewonnene Kochsalzlösung wird abfiltriert, gut mit Filter- 

 papier abgepreßt, mit Hilfe der noch anhaftenden Salzreste in wenig 

 Wasser gelöst und gegen ganz schwache Natronlauge 2 Tage bei 0'^ dialy- 

 siert (O'OOoVo NaOH). Es entstehen so etwa O^Vo enthaltende Fibrinogen- 

 lösungen, die nahezu salzfrei sind. Die nicht dialysierten Lösungen enthalten 

 1 — 2% Fibrinogen neben 1 — 2<'/o Kochsalz und Spuren KaUumoxalat. 



Zur Hebung der Ausbeute, besonders aber bei Verwendung von Rinder- 

 blut ist es zweckmäßig (Ilcuhncr), die jeweiligen Niederschläge der Koch- 

 salzhalbsättigung in der b'^/oigen NaCl-Lösung durch Zusatz einer Spur 

 von Nag CO3 bei alkalischer Reaktion zu lösen, die erneute Kochsalzfällung 

 aber erst nach genauer Neutralisation dieser Lösungen mit Essigsäure zu 

 vollziehen. 



L^m das L^nlöslichwerden von Fibrinogenanteilen zu vermeiden, darf 

 man die Niederschläge der Salzfällungen nicht unter Wasser stehen lassen. 



Aus der nahezu salzfreien Lösung kann das Fibrinogen durch Koagu- 

 lieren, d. h. Erhitzen auf öS — 60" während mehrerer Minuten, oder durch 

 Alkoholzusatz denaturiert dargestellt werden. 



Zur äußersten Reinigung des Fibrinogens von Fibrinoglobulinbei- 

 mischungen wird die salzfreie Fibrinogen lösung mit dem doppelten 

 Volumen einer gesättigten Natriumfluoridlösung gefällt. Der Niederschlag 

 (gallertig bei Pferdefibrinogen, flockig bei Rinderfibrinogen) wird in Wasser, 

 das 0-05Vo Ammoniak enthält, gelöst. Nach Zusatz von o— 5^o Kochsalz 

 kann diese Reinigung durch al)ermaliges FäUen mit Natriumfluorid wieder- 

 holt werden. Aus den NH3-, NaCl- und NaFl-haltigen Lösungen wird das 

 Fibrinogen durch Erhitzen auf 56 — 58° während 5 Minuten auskoaguüert 

 (Huiscamp'^). 



Alle auskoagulierten Fibrinogene werden mit heißem Wasser, iUkohol 

 und Äther gewaschen und schließlich bei 110" zur (iewichtskonstanz ge- 

 trocknet. 



1) W. HiiiscaiHp, Zur Fibrinoglobulinfrage. Zeitschr. f. phys. Chem. Bd. 44. S. 182 

 (1904). 



