Darstellung der Proteine der Tierwelt: Histone und Protamine. 447 



Sulfat mit Alkohol ausgefällt und dieses weiter gereinigt (Ausscheidung 

 als Öl, Fällung als Pikrat und Wiedergewinnung des Sulfats). 



Die reifen Testikel werden zerhackt. Die zerhackte Masse wird mit 

 Wasser anhaltend geschüttelt, durch ein Tuch geseiht und die milchige, kollerte 

 Flüssigkeit mit einigen Tropfen Essigsäure versetzt. Hierdurch bewirkt 

 man, daß die im Wasser suspendierten morphotischen Elemente sich zu- 

 sammenballen. Die Flüssigkeit wird filtriert, der Filterrückstand mehrmals 

 mit Alkohol ausgekocht, sodann mit Äther extrahiert und bei Zimmer- 

 temperatur getrocknet. 



Je 100^ dieser Spermamasse werden mit 500 cm^ iVoiger Schwefel- 

 säure Vi Stunde lang auf der Schüttelmaschine ausgeschüttelt, auf der 

 Nutsche abgesaugt und diese Extraktion noch dreimal mit der gleichen 

 Menge Schwefelsäure wiederholt. Die vereinigten Filtrate werden mit der 

 dreifachen Menge Alkohol gefällt, die Flüssigkeit nach 12 bis 24 Stunden 

 dekantiert und der Niederschlag, welcher aus schwefelsaurem Protamin 

 besteht, abgesaugt. Die Ausbeute an diesem Rohprodukt beträgt etwa 20Vo 

 der trockenen Spermamasse. Zur weiteren Pveinigung löst man den Nieder- 

 schlag in heißem Wasser und wiederholt die Alkoholfällung. Wenn man 

 jetzt den Niederschlag in etwa Vj.J heißen Wassers löst und im Scheide- 

 trichter erkalten läßt, so scheidet sich ein kleiner Teil des Protaminsulfates 

 als gelb gefärbtes Öl ab. Dieser am schwersten lösliche Teil des Sulfates 

 wird abgetrennt, die über dem Öl stehende Flüssigkeit auf ein kleines 

 Volumen eingedampft und im Scheidetrichter zur Ausscheidung der Haupt- 

 menge des Öls stehen gelassen. Der nunmehr gewonnenen Fraktion des 

 Protaminsulfats haftet hartnäckig etwas Nukleinsäure an. Um das Prota- 

 min hiervon zu befreien, wird es wieder in warmem Wasser gelöst, mit 

 Natriumpikrat ausgefällt, der Niederschlag abgesaugt, gut ausgewaschen 

 und möglichst bald durch Ausschütteln mit Äther bei Gegenwart von 

 Schwefelsäure von der Pikrinsäure wieder befreit. (Läßt man das Protamin- 

 pikrat längere Zeit stehen, so ist es schwer, die Pikrinsäure nachher völlig 

 wieder zu entfernen und zum Schluß rein weiße Präparate zu bekommen.) 

 Das nunmehr erhaltene Sulfat wird wieder mit Alkohol ausgefällt und die 

 Alkoholfällung noch einmal wiederholt. Das Sulfat soll ein lockerer, weißer 

 Niederschlag sein, fällt es klebrig aus, so muß das Lösen in Wasser und 

 Fällen mit Alkohol wiederholt werden. 



Nach dieser Methode können Salm in und Clupein in gleicherweise 

 gewonnen w^erden, bei der Darstellung von Sturin und Accipenserin 

 muß die Lösung des Sulfats wegen der größeren Löslichkeit dieser Salze 

 weiter eingedampft werden. Die Lösung des Cyclopterinsulfats ') muß 

 bis auf 2» abgekühlt werden, damit sich alles Protaminsulfat als Öl ab- 

 scheidet. 



*) X Morkowin, Ein Beitrag zur Kenntnis der Protamine. Zeitschr. f. phvsiol 

 Chemie. Bd. 28. S. 313 (1899). 



