Allffemeine Technik und Isolierung der Monoanünosituren. 471 



Säure durch Schütteln der Lösung des erwähnten Destillationsrückstandes 

 mit Kupferoxydul gebunden wird. Sobald die Lösung eine grünblaue Fär- 

 bung annimmt, wird abfiltriert und der Rückstand so lange mit Wasser 

 gewaschen, bis eine verdampfte Probe keinen organischen Rückstand mehr 

 hinterläßt. Die vereinigten Filtrate werden nun mit Schwefelwasserstoff von 

 gelöstem Kupfer befreit. Aus dem meist hellgelb gefärbten Filtrat vom 

 Kupfersulfid wird der Schwefelwasserstoff durch Durchleiten von Luft ent- 

 fernt. Jetzt stellt man entweder titrimetrisch oder graviraetrisch den 

 Chlorgehalt der Lösung fest und setzt entweder die berechnete Menge von 

 Natron- oder Kalilauge zu oder aber man schüttelt die Lösung mit der 

 berechneten ^Nlenge Silberkarbonat. Aus der von Salzsäure vollständig be- 

 freiten Lösung läßt sich das Tyrosin durch Einengen leicht abscheiden. Es 

 ergibt sich ohne weiteres, daß diese Methode sehr umständlich ist. und aus 

 diesem Grunde wird die Hydrolyse mit Salzsäure fast ausschließhch dann 

 angewandt, wenn auf eine direkte Isolierung von Tyrosin und auch von 

 Lysin, x\rginin und Histidin verzichtet mrd. 



Die verschiedenartigen Proteine lösen sich sehr verschieden leicht in 

 rauchender Salzsäure und in 25"/oiger Schwefelsäure. Am besten wird zu- 

 nächst die Säure abgemessen und dann in einen ausreichend großen Rund- 

 kolben eingefüllt. Im allgemeinen wird von der rauchenden Salzsäure das 

 dreifache Gewicht der angewandten Eiweißmenge und von der Schwefelsäure 

 das fünf- bis zehnfache Gewicht davon verwendet. Löst ein bestimmtes Protein 

 sich sehr schwer in den genannten Säuren oder quillt es sehr stark auf, so 

 wird man unter Ljnständen auch größere Säuremengen anwenden. Es wird 

 nunmehr das Protein in die Säure eingetragen, und zwar unter beständigem 

 Umschütteln. Geht es direkt in Lösung, so kann sofort das Kochen am 

 Rückflußkühler angeschlossen werden. Sehr oft quillt jedoch das Protein 

 nur auf. In diesem Falle wird es mit der Säure so lange auf dem Wasser- 

 bade erhitzt, bis vollständige Lösung eingetreten ist. Genügt das Erhitzen 

 auf dem Wasserbade nicht, so wird im Ölbade weiter gekocht. Manche 

 Eiweißkörper, z. B. manche Seidenarten, gehen selbst nach mehrstündigem 

 Kochen im Ölbade nicht ganz in Lösung. In diesen Fällen ist es ratsam, 

 größere Säuremengen zu wählen und das Kochen länger als sonst üblich 

 auszudehnen. Verwendet man Schwefelsäure, so kommt man in solchen 

 Fällen rascher zum Ziele, wenn das Protein zunächst bei gewöhnhcher Tem- 

 peratur mit lO^/oiger Schwefelsäure übergössen wird. Es tritt dann bei 

 wiederholtem Um schütteln bald Lösung ein. Nunmelir wird die Lösung mit 

 soviel Wasser verdünnt, l)is sie auf einen Gehalt von 2ö°/o an Schwefelsäure 

 gebracht ist. 



Beim Auflösen der I'roteine mit Säuren tiitt stets eine mehr oder 

 weniger starke Färbung der Lösung ein. Bald erhält man violettgefärbte 

 Lösungen, bald mehr braungefärbte. Sobald die Lösung des Proteins eine 

 vollständige oder doch nahezu vollständige ist, beginnt man mit dem Er- 

 hitzen im Luftbade auf dem Baboblech. Bei Verwendung von rauchender 

 Salzsäure genügt im allgemeinen ein Kochen während sechs Stunden — 



