Allgemeine Technik und Isolierung der Monoaminosäuren. 48 ^ 



Abtrennung des Glykokolls. Wie schon erwähnt, bildet es ein in absohitem 

 Alkohol seinver lösliches Esterchlorhydrat. Zur Prüfung auf Glykokoll werden 

 die tief schmelzenden KristaUfraktionen verwendet. Sehr rasch läßt sich 

 die Frage entscheiden, ob neben Glykokoll noch andere Aminosäuren vor- 

 handen sind. Es genügt, das optische Verhalten der Lösung zu prüfen. 

 Meist findet sich neben Glykokoll noch d-x\lanin. Zur Trennung beider 

 Aminosäuren wird entweder die ganze Kristallfraktion oder ein aliquoter 

 Teil derselben mit der 5fachen Menge des Gewichtes der angewandten, 

 fein gepulverten Substanz an absolutem Alkohol Übergossen. Nun wird in 

 die Suspension so lange trockene, gasförmige Salzsäure eingeleitet, bis Sätti- 

 gung eingetreten ist. Hat sicü nicht alles gelöst, so wird auf dem Wasser- 

 bad solange gekocht, bis alles in Lösung gegangen ist. Nunmehr wird 

 die Lösung auf Eis abgekühlt, mit einem Kriställchen von Glykokollester- 

 chlorhydrat geimpft und gut verschlossen auf Eis aufbewahrt. Von den 

 ausgeschiedenen Kristallen wird nach 12 Stunden abfiltriert. Durch Ein- 

 engen der Mutterlauge können weitere Abscheidungen bewirkt werden. Das 

 Glykokollesterchlorhydrat schmilzt gegen 144°. Aus der Mutterlauge der 

 letzten Abscheidung setzt man die Ester in der oben geschilderten Weise in 

 Freiheit, destilliert die Ester und verseift sie durch Kochen mit Wasser 

 und gewinnt dann dm'ch Verdampfen der Lösung die noch vorhandenen 

 Aminosäuren. Sehr oft erhält man auf diese Weise reines d-Alanin. 



Zur Trennung von Glykokoll und Alanin ist auch das Pikrat sehr 

 geeignet.!) Man löst die zu untersuchende Kristallfraktion in wenig heißem 

 W^asser und vermischt sie mit der einfachen Gewichtsmenge Pikrinsäure 

 in alkoholischer Lösung. Beim Abkühlen kristallisiert Glykokollpikrat vom 

 Schmelzpunkt 190° aus, während das Alaninpikrat in Lösung bleibt. 



Bei sorgfältiger Fraktionierung der Aminosäureester sind in den drei 

 erwähnten Esterfraktionen außer den genannten Aminosäuren keine anderen 

 vorhanden. Eine ganz andere Art der Verarbeitung tritt bei der 4. Esterfrak- 

 tion (Ölbad von 100^180°, Ol— 0-5mm Druck) ein. Sie enthält die Ester 

 des Phenylalanins, der Glutaminsäure, der Asparaginsäure und des Serins. Zu- 

 nächst ward der Phenylalaninester abgetrennt. 2) Er ist in Äther leicht löslich. 

 Die Esterfraktion wird zunächst mit dem fünffachen Volumen Wasser ver- 

 setzt. Gewöhnlich trübt sich hierbei die Lösung, indem der Phenylalaninester 

 sich in Form von feinen Tröpfchen abscheidet. Nunmehr wird die Lösung mit 

 dem gleichen Volumen Äther im Scheidetrichter ausgeschüttelt. Die wässe- 

 rige Lösung verhert ihre Trübung. Sie wird jetzt abgelassen. Die ätherische 

 Lösung enthält den Phenylalaninester und außerdem noch geringe Mengen 

 der anderen Aminosäureester. Um diese zu entfernen, wird die ätherische 

 Lösung wiederholt mit Wasser gewaschen. Die gesamten wässerigen Lösungen 

 w^erden vereinigt und durch Kochen mit Barvt verseift. Man nimmt ungefähr 



>) P.A. Levene, GlycocollPicrate. The Journal of Biol. Chemistry. Vol. 1. p. 413(1906). 

 ") Emil Fischer und Emil Abderhalden, Hydrolyse des Oxyhämoglobins durch 

 Salzsäure. Zeitschr. f. physiol. Chemie. Bd. 36. ö. 268 (1902). 



Abderhalden, Handbuch der biochemischen Arbeitsmethoden. II. 31 



