Isolierung von Histidin, Lysin und Arginin (Ornithin und Guanidin). 499 



Zur quantitativen Bestimmung von Histidin, Lvsin und Arginin im 

 Eiweit" mittelst Hydrolyse wird der zu untersuchende Eiweißkörper in einer 

 entsprechenden Menge, je nach dem Stickstoff gehalt , z. B. 20 — 50^, mit 

 einer Mischung der dreifachen Menge seines Gewichtes konzentrierter Schwefel- 

 säure und der sechsfachen Menge seines Gewichtes Wasser 14 Stunden am 

 Rückflußkühler gekocht. Es ist zweckmäßig, zunächst auf dem Wasserbade 

 so lange zu erhitzen, bis alles in Lösung gegangen ist und das lästige 

 Schäumen aufgehört hat (1 — 172 Stunden). Dann setzt man den Kolben in 

 ein Ölbad und reguliert dessen Temperatur sorgfältig, so daß kein Stoßen 

 eintritt. Die Spaltungsflüssigkeit wird sodann mit Wasser verdünnt, filtriert 

 zum Liter aufgefüllt und zur Feststellung des Gesamtstickstoffs in 10 cm^ 

 derselben der Stickstoff nach Kjeldahl bestimmt.j 



Entfernung der Schwefelsäure und des Huminstickstoffs. 

 Bestimmung des Ammoniaks. 



Die schwefelsaure Lösung wird zum Sieden erhitzt und zwecks Ab- 

 stumpfung der zur Spaltung in Verwendung gebrachten Schwefelsäure nach 

 und nach bis zur schwach sauren Reaktion mit einer kochend heißen konzen- 

 trierten Ätzbarytlösung versetzt. Der entstandene Niederschlag von schwefel- 

 saurem Baryt, von dem auch stickstoffhaltige Körper, die sogenannten 

 Huminstoffe, mit niedergerissen und festgehalten werden, wird abgesaugt, 

 dreimal mit Wasser verrieben und ausgekocht, abgenutscht und so lange 

 mit kochendem Wasser ausgewaschen, bis die abtropfende Flüssigkeit mit 

 Phosphorwolframsäure keine Fällung mehr gibt. 



Filtrat und Waschwasser werden vereinigt und durch Eindampfen auf 

 1/ gebracht. Alsdann wird in 10 cm ^ der Flüssigkeit nach Kjeldahl der 

 Stickstoff bestimmt. Zieht man die so gefundene Stickstoffmenge von dem 

 Gesamtstickstoff ab, so erhält man den im Barytniederschlag zurückgeblie- 

 benen „Huminstickstoff \". 



Die gesamte Flüssigkeit versetzt man nun mit verdünnter Atzbaryt- 

 lösung bis zur eben neutralen Reaktion, dann mit ungefähr h rj Baryum- 

 karbonat, das zuvor in der Reibschale fein zerrieben und mit Wasser zu 

 einem dünnen Brei aufgeschwemmt war. 



Das bei der Spaltung gebildete Ammoniak wird beim Erhitzen der 

 Flüssigkeit dadurch in Freiheit gesetzt und kann durch Destillation mit 

 Wasserdampf übergetrieben und durch Auffangen in yL-j^^ormalsäure zur 

 Titration gebracht werden. Es ist dabei natürhch notwendig, aus dem 

 Destillat die mitübergegangene Kohlensäure zuerst durch Aufkochen zu 

 entfernen. 



Die auf diese Weise behandelte Flüssigkeit wird filtriert, das auf dem 

 Filter bleibende Gemisch von Baryumkarbonat und -sulfat dreimal mit Wasser 

 ausgekocht und mit heißem Wasser nachgewaschen. Filtrat und Waschwasser 

 werden vereinigt, mit Schwefelsäure angesäuert, stark eingedampft, nötigen- 



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