Metlioden zur biologischen Spaltung razemischer Aminosäuren etc. 563 



folgenden Tagen je V* — V2 Stunde lang zum Sieden erhitzt. Die abge- 

 kühlten Lösungen werden dann wie üblich mittelst eines ausgeglühten 

 Platindrahts mit der Reinkultur des betreffenden Pilzes geimpft und schließ- 

 lich bei Zimmertemperatur oder im Brutschrank bei dem Temperatur- 

 optimum des angewandten Mikroorganismus sich selbst überlassen. 



Die Entwicklung des Pilzes beginnt bereits nach einigen Tagen. Es 

 zeigen sich dann gewöhnlich weißliche Flecke auf der Oberfläche der Flüssig- 

 keit, die sich nach und nach vollständig mit einer sporentragenden Pilz- 

 decke überzieht. Ein Teil des Pilzm}'cels entwickelt sich untergetaucht in 

 der Lösung am Boden des Gefäßes. Bei Anwendung von Hefe trübt sich 

 der Kolbeninhalt allmählich unter Aufsteigen von Gasblasen. 



Die Versuche können als beendet gelten, wenn die Pilzdecke kein 

 merkliches Wachstum mehr zeigt und eine Gasentwicklung in der Flüssig- 

 keit nicht mehr zu beobachten ist. Die Dauer der Pilzspaltung ist eine sehr 

 verschiedene und von vielen Zufälligkeiten abhängig. Sie kann 4 bis 12 

 Wochen im ganzen betragen. Doch ist auch häufig nach dieser Zeit die 

 Aminosäure nicht optisch rein, sondern noch mit dem Pazemkörper ge- 

 mischt wieder zu gewinnen und muß dann, wenn dies erforderlich, noch 

 ein zweites Mal- nach Zugabe von neuer Nährlösung und wiederholter 

 Sterilisierung mit dem betreffenden Pilz angesetzt werden. 



Zur Isolierung der unangegriffenen optisch aktiven Aminosäure wird 

 das Pilzmycel durch Filtration entfernt und die farblose bis gelblich gefärbte 

 Flüssigkeit auf dem Wasserbad zur Trockne verdampft. Aus dem Rück- 

 stand extrahiert man die Aminosäure durch Kochen mit Alkohol, dem 

 etwas konzentrierte Ammoniakflüssigkeit zugesetzt ist. Oder man fällt aus 

 der ursprünglichen filtrierten Lösung die Schwefelsäure und Phosphorsäure 

 mit Barytwasser, kocht das Filtrat mit frisch gefälltem Kupferoxyd und 

 scheidet durch Eindampfen die Aminosäure in Form ihres Kupfersalzes 

 ab, das in üblicher Weise weiter verarbeitet wird. 



Beispiel: Die Lösung von og dl-Leucin in bOO crn^ Wasser wird 

 nach Zusatz von 10 cm^ der erwähnten Nährsalzflüssigkeit in 2 Glaskolben 

 verteilt, sterilisiert und mit Penicillium glaucum geimpft. Nach 6 Wochen 

 wird die Lösung filtriert, eingedampft und der Rückstand mit wässerigem 

 Ammoniak enthaltendem Alkohol ausgekocht, so daß die Salze ungelöst 

 zurückbleiben. Die aus dem Extrakt beim Verdunsten erhaltene rohe Amino- 

 säure liefert umkristallisiert 0"9 g reines d-Leucin. 



IL Spaltung durch Hefegärung. \) 



Für diese Methode der Aminosäurenspaltung dient ausschließlich 

 gut ausgewaschene und abgepreßte, möglichst eiweißarme obergärige 



1) Felix Ehrlich, Über eine Methode zur Spaltung razemischer Aminosäuren 

 mittelst Hefe. I. Biochem. Zeitschr. Bd. 1. S. 8 (1906) ; II. Biochem. Zeitschr. Bd. 8. 

 S. 438 (1908). — Derselbe, Über das natürliche Isomere des Leucins. IL Ber. d. 

 Deutsch, ehem. Ges. Bd. 40. S. 2538 (1907). — Felix Ehrlich und Adolf Wendel, Zur 

 Kenntnis der Leucinfraktion des EiAveißes. Biochem. Zeitschr. Bd. 8. S. 399 (1908). 



