Tierische Pigmente und Farbstoffe. 751 



Methode nach Bouma.^) Sie beruht im Prinzip darauf, daC» sich 

 das durch Säurespaltung in Freiheit gesetzte Indoxyl mit Isatinsalzsäure 

 zu dem einheitlichen Indigorot umsetzt, das nachher mit einer auf reines 

 Indigrot eingestellten Kaliumpermanganatlösung titriert wird. 



Auch hier überzeugt man sich durch kolorimetrische A'orproben von 

 dem bestehenden Indoxyh'eichtum , indem man gleiche Mengen Harn und 

 Isatinsalzsäurereagens (20 mg Isatinum Merck purissimum in 1000 cm^ 

 chemisch reinster, eisenfreier konzentrierter Salzsäure) kocht und mit et- 

 was Chloroform ausschüttelt. Indikanreichtum veranlaßt eine dunkelwein- 

 rote, Indikanarmut eine helle rosarote Hirbung des Chloroforms. Im er- 

 steren Falle verarbeitet man 25 — 50 cm^, im letzteren FaUe oOO cni^ Harn. 

 Diese 800 cni^ werden mit 30 crn^ basischem Bleiacetat gefällt; von dem 

 klaren Filtrat werden 275 cm^ {= 250 cm^ Harn) abgemessen und ^/'^ Stunde 

 lang mit dem gleichen Volumen der Isatinsalzsäurelösung auf dem Wasser- 

 bad erhitzt. Die abgekühlte Flüssigkeit wird dann in der oben beschrie- 

 benen Weise (Methode von Wang) mit omal oO cm'^ Chloroform erschöpft. 

 Nach dem Absetzen gießt man die Chloroformlösung vorsichtig in ein 

 Kölbchen, destilliert die Hauptmasse Chloroform am Wasserbad ab und 

 trocknet 2 Stunden bei 110". Aus dem Rückstand entfernt man das über- 

 schüssige Isatin und die Salzsäure durch mehrfaches Waschen mit heißem 

 Wasser, Das Residuum trocknet man abermals, löst wie bei Wang (siehe 

 oben) in Schwefelsäure, verdünnt und titriert mit Permanganatlösung. 



Die Indigolösung sowie die Titrierflüssigkeiten müssen vollkommen 

 klar sein. Die Verdünnung der Indigrotflüssigkeit soll die Verdünnung von 

 1 g Indigrotdisulfonsäure auf 20000 cw^ Wasser nicht überschreiten. Erfolgt 

 beim Titrieren eine Braunfärbung durch Abscheidung allerfeinsten Mangan- 

 dioxyds, so ist der Säuregrad mit starker Schwefelsäure zu erhöhen. 



Die Berechnung der gefundenen Indigomenge erfolgt in der Weise, 

 daß man die Permanganatlösung vorher auf eine Lösung von reinem In- 

 digorot einstellt. Diese Lösung bereitet man sich derart, daß man 

 käufhches Indigorot in Chloroform löst, aus dem Verdampfungsrückstand 

 das reine Indigrot in Äther aufnimmt, und den getrockneten Ätherrück- 

 stand {= gereinigtes Indigrot) in einer Menge von 5 oder 10 mg genau 

 abwägt und in konzentrierter Schwefelsäure löst. Hierzu fügt man zu be- 

 liebiger Verdünnung Wasser und bestimmt durch Titration mit einer Per- 

 manganatlösung (siehe bei Watig) diejenige Menge Permanganat, welche 

 1 mg Indigrot entspricht. Bei der Umrechnung der im Hauptversuch der 

 Indoxylbestimmung verbrauchten Permanganatmenge (ausgedrückt in Kubik- 

 zentimeter der verbrauchten, vorher eingestellten Lösung) ist die Hälfte 

 von dem gefundenen Wert für die Menge präforraierten Indoxyls in Rech- 

 nung zu setzen, da ja die Hälfte des Indigrotmoleküls von dem im Ver- 

 such zugeführten Isatin gehefert worden ist. 



') J.Bouma, Über Bestimmung des Harnindikans. Zeitschr. f.physiol.Chem. Bd. 32. 

 S. 82 (1901). — Nachtrag zur Methode der Indikanbestimmung im Harn. Zeitschr. f. 

 physiol. Chem. Bd. 39. S. 356 (1903). 



