Allgemeine chemische Methoden. 127H 



vorliegt. So spricht das Ausbleiben der Kiippeiuiigsrenktion bei den Nuklein- 

 säuren dafür, daß der Wasserstoff bei 7 oder (^ durch den liest des 

 Nukleinsäurenioleküls ersetzt ist.M 



Zur Unterscheidung- des Imidazolringes vom Pvrimidinring scheint 

 die Reaktion nur bei den sauerstofffreien Systemen geeignet zu sein, denn 

 sauerstoffhaltige Pyrimidine, wie z. B. das 4-MethyI-uracil, treten mit 

 Diazoniumsalzen mitunter auch zu Farbstoffen zusammen. 2) 



Eine andere wertvolle Anwendung der Kuppeluugsreaktion ist von 

 Herrn. Pauli/ bei der Untersuchung des Histidins, eines Imidazolderivates, 

 gefunden worden. Versetzt man eine soda- alkalische Lösung von Histidin 

 mit Diazobenzol-sulfosäure, so erhält man einen Fari)stoff, der in saurer 

 Lösung rein orange, in alkalischer dunkelkirschrot gefärbt ist. Da keiner 

 der übrigen untersuchten Eiweiüspaltkörper, mit Ausnahme des Tyrosins, 

 eine solche Färbung gibt, so haben wir in dieser Reaktion ein empfind- 

 liches und wertvolles Mittel, um Histidin bei Abwesenheit von Tyrosin zu 

 erkennen, und zwar nicht allein in Gemischen mit anderen Eiweißspalt- 

 körpern, sondern auch in den ursprünglichen Eiweißkörpern, in denen es 

 noch mit anderen Gruppen verkettet ist. 



Zur Kuppelung mit Histidin, wie auch für andere derartige Farben- 

 reaktionen eignet sich gut die Diazobenzol-sulfosäure. Es ist zweck- 

 mäßig, die Säure vor dem Gebrauch jedesmal frisch darzustellen. 



Diazoreaktion des Histidins.^) 



1. Darstellung der Diazobenzol-sulfosäure. 2g feingepulverte Sulfanil- 

 säure ^verden mit 3 cm'^ Wasser und 2 cm^ konzentrierter Salzsäure zu einem Brei 

 geschüttelt und in kleinen Portionen innerhalb einer Minute mit einer Lösung von 1 f/ 

 frischem Kaliumnitrit in 1 — 2 cm^ Wasser versetzt, wobei nach jedem Zusatz mit kaltem 

 Wasser gekühlt wird. Die Sulfanilsäure geht größtenteils rasch in Lösung, und an 

 ihre Stelle tritt alsbald ein dichter, weißer, kristallinischer Niederschlag von Diazoben- 

 zol-sulfosäure. der nach einigen Minuten abgesaugt und mit wenig Wasser ausgewaschen 

 wird. Unveränderte Sulfanilsäure beeinträchtigt die Reaktion nicht. 



2. Kuppelungmit Histidin. Man versetzt die zu prüfende Lösung bis zum Über- 

 schuß mit Sodalösung, die sich wegen der leicht erfolgenden Umlagerung der Diazoniumsalze 

 in Isodiazokörper (siehe S. 1275) mehr empfiehlt als Natronlauge, und fügt 3—5 cw^ einer 

 unmittelbar vorher bereiteten soda-alkalischen Lösung von einigen Zentigrammen Diazo- 

 benzol-sulfosäure hinzu. Nach Verlauf von längstens drei Minuten, gewöhnlich aber 

 sofort, tritt eine dunkelkirschrote Färbung auf, die selbst beim Verdünnen mit der 

 vielfachen Menge Wasser ihren roten Ton behält und nicht gelbstichig wird. Beim 

 Ansäuern schlägt die Farbe in ein reines Orange um. 



Zur Darstellung der Kuppelungsprodukte der Imidazol- und Purin- 

 derivate mit Diazoniumsalzen bringt man die letzteren, in AlkaU gelöst. 

 unter guter Kühlung mit einem Diazokörper respektive einem Diazotierungs- 

 gemisch zusammen; hierbei tritt sofort eine tiefrote Färbung ein. Die 



') Richard Burian, Zur Kenntnis der Bindung der Purinbasen im Nukleinsäure- 

 molekül. Ber. d. Deutsch, ehem. Ges. Bd. 37, S.711 (1904). — Hans Fischer, 1 c. S. 78. 

 *) Herrn. Pauli/, 1. c. 

 3) Herrn. Paul]/, 1. c. S. 516. 



