Methoden zur Aufarbeitung des Blutes in seine einzelnen Bestandteile. 203 



erst vor kurzem an anderer Stelle^) eine eingehende Darstellung der Gewin- 

 nung, qualitativen und quantitativen Bestimmung des Hämoglobins erschienen. 



Immerhin aber mögen hier einige Worte über die Gewinnung von 

 Hämoglobinkristallen nach der Alkoholmethode aus Pferde- und Rinder- 

 blut auf Grund von Erfahrungen, mit deren weiterer Ausarbeitung ich noch 

 beschäftigt bin, Platz finden. 



Blutkörperchen, die man entweder durch freiwilliges Sedimentieren 

 (Pferdeblut) oder durch Ausschleudern mit Hilfe der Zentrifuge isoliert 

 hat, wäscht man wiederholt (mindestens 2mal) mit O'^^/oiger XaCl-Lösung 

 auf der Zentrifuge. 



Den Blutkörperchenbrei versetzt man dann mit etwa dem gleichen 

 Volumen ausgekochten Wassers von etwa 40°, bringt die Mischung zweck- 

 mäßig ebenfalls auf 35 — 40** und trennt die Lösung von den ungelösten 

 Körperchen, deren Menge nicht mehr allzu groß ist. und dem Stroma mit 

 Hilfe der Zentrifuge. Die abgehobene Lösung kühlt man dann auf 0" ab 

 und versetzt sie mit ebenfalls gekühltem absolutem Alkohol, den man unter 

 beständigem Umschütteln der Lösung in dünnem Strahl zufließen läßt 

 (andernfalls bilden sich leicht amorphe Gerinnsel). Bei Pferdeblut verwende 

 ich auf 5 Volumen Blutlösung ein Volumen Alkohol . bei Rinderblut auf 

 3 — 4 Volumen ein Volumen. Man bringt die Mischung bei Pferdeblut in 

 Eis. bei Rinderblut am besten in eine Kältemischung (Eis und Kochsalz). 

 Bei Anwendung von Pferdeblut ist nach 12 Stunden in der Regel die ganze 

 Mischung zu einem Kristallbrei erstarrt , bei Rinderblut ist mindestens 

 24stün(liges Stehen notwendig. Die Kristalle trennt man von der Mutter- 

 lauge am leichtesten und raschesten mit Hilfe der Zentrifuge, wobei es 

 sich empfiehlt, die Gläser vor dem Einfüllen des Kristallbreies abzukühlen. 



Zum Lmkristallisieren dieser ersten, mit Hilfe von Alkohol erhaltenen 

 Kristalle verfahre ich in folgender Weise: Die gut ausgeschleuderten 

 Kristalle übergießt man mit soviel ausgekochtem Wasser von etwa 40°, 

 daß ein Teil der Kristalle auch beim fj-wärmen der Mischung auf 30 bis 

 35" noch ungelöst bleibt. Man trennt mit Hilfe der Zentrifuge Gelöstes 

 und Tugelöstes und stellt die Lösung in schmelzendes Eis. Nach wenigen 

 Stunden (3—4) beginnt beim Pferdeblut die Kristallisation und nach 

 12 Stunden haben sich meist grolJe Mengen von Kristallen ausgeschieden. 

 Bei Rinderblut ist langes Stehen erforderlieh. Dit'ser linstand bringt es 

 mit sich, daß die Kristalle aus Rinderblut meist niethäniogloltiidialtig sind, 

 während in dem auch noch ein 3. .Mal umkristallisierteu Pferdehämoglobin 

 spektropiiotometrisch nachweisbare (^)uantit;iteii von Met-Ilb sich nicht finden. 



Neben lläinogloi)in findet sich nach Wooldridtic-) Pa raglobnlin, 

 das man am liesteii aus dem Stroma, nach dem oben^") beschriebenen 



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 jfloltiiis. Tiijcralrdt, Ilaiidlmcli drr |iliysi(ilofj. Methodik. Loipzi;; hol Hirzcl (ÜMO). 



■-) li. \\'iii>lilri<lii(\ /iir Kciiiitiiis dor IMutkiiiptMidicu. Aich. f. Anal. ii. IMiys. ISSl. 

 (l'hysiol. Aliteilun«) S. 381). 



") Siehe S. 14(5. 



