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Auch hier ist es notwendig, zur Erhaltung eines guten Resultates, der Nahrlösung 

 viel Sand und Natriumhumat oder humusreiche Erde zuzufügen, und wenn die 

 Decke sicli bildet, diese nicht durch Schütteln zu brechen; die Kuituren mussen also 

 ruhig stehen bleiben. 



Reinkultur. 



Obschon nicht besonders schwierig, erfordert die Reinkultur des Spirillums 

 grosse Aufmerksamkeit. Auf Platten von der Zusammensetzung: Wasser, 2% Agar, 

 1 % Kalziummalat, 0,05% K2HPO4 entstehen bei 20—30° C. an der Luft kleine, trocke- 

 ne Koloniën (Fig. b), welche aus unbeweglichen Stabchen ohne Fett bestehen und 

 nicht deutlich spirillenahnlich sind, was übrigens auch bei anderen Spirillenarten be- 

 merkt wird. Die Koloniën oxydieren das Malat stark und sind erfüllt und umgeben 

 von kleinen, durchsichtigen glasartigen Sphariten von Kalziumkarbonat, also ahnlich 

 wie in den Azotobacterkulturen, wo ich Körner von bis Millimeter Grosse f and. Ware 

 es möglich, dieselben weiter wachsen zu lassen, so würden wertvoUe Perlen zu erhalten 

 sein. Die Koloniën sind meistenteils wirklich rein und enthalten nicht die Infektionen, 

 welche es so schwierig machen, vöUig reine Azoiobacter'kolomen zu erhalten. Diesesist 

 jedoch nicht mit allen Koloniën der Fall; die infizierten Koloniën sind viel grösser 

 wie die reinen. Infolge einer starken Schleimbildung sehen sie wie Kleistertropfen 

 aus und auf den Platten nehmen sie wochenlang an Volum zu. Dieser Schleim ist als 

 Wandsubstanz, die durch die infizierende Art gebildet ist, aufzufassen und beher- 

 bergt wieder leicht andere fremde Bakterien. Die starke Schleimbildung, welche für 

 Azotobacter so charakteristisch ist, besonders bei Zuckernahrung, fehlt dem Spirillum 

 selbst, wie es scheint, ganzlich, doch muss ich hervorheben, dass dieser Vorgang in 

 den infizierten Koloniën noch weiterer Erklarung bedürftig ist. 



Versetzt man den Nahrboden mit einer geringen Menge einer guten stickstoff- 

 haltigen Nahrung, wie Fleischbouillon, so verbessert sich das Wachstum sehr; ver- 

 dünnter Fleischbouillonagar scheint der beste Nahrboden, und darauf nehmen viele 

 Stabchen normale Spirillengestalt mit mehreren Windungen an (Fig. c), wahrend 

 Fettbildung ganz ausbleibt. Man sieht selbst in solchen Praparaten spirochatenahn- 

 liche Individuen herumschwimmen. 



In flüssige Nahrmedien übergebracht, entwickeln die Reinkulturen sich nur dann 

 gut, wenn gute Stickstoffnahrung vorhanden ist, z.B. in verdünnter Malatbouillon. 

 Stickstofffreie Malatiösungen geben nur dann Wachstum, wenn viel humöse Erde 

 oder Humate zugesetzt werden. 



Die partiellen Reinkulturen, welche also noch andere saprophytische Bakterien 

 enthalten, geben ein besseres Wachstum; vielleicht weil dadurch die stark ausge- 

 sprochene Mikroarophilie der Spirillen begunstigt wird. Alle früher besprochenen An- 

 haufungen sind solche partiellen Reinkulturen und beweisen, dass die Stickstoffbin- 

 dung darin nur durch die Spirillen stattfindet, denn wenn diese fehlen, so ist keine 

 Stickstoffmehrung nachweisbar. 



Stickstoffbestimmungen. 



Azotobacter- und Clostridium-ireie Rohanhaufungen und partielle Reinkulturen 

 in Kalziummalat-haltigen Nahrlösungen sind für die Bestimmung der Stickstoff- 



