Methodik. 363 



finden. Der eine 5 cm lange Schenkel wird in das Bakterienmaterial 

 getaucht und dann wird mit ihm eine Serie von Platten oberflächlich 

 poliert, wodurch eine allmähliche Verdünnung und gleichmäßige Ver- 

 teilung des Materialc erfolgt, 



Petrischalen mit Nährböden, die im Brutschranke 

 nicht verflüssigt werden, kommen mit dem Boden nach 

 oben in den Brutschrank. 



Statt der Isolierung auf Petrischalen kann man auch Isolierung 

 auf schräg erstarrten Agarröhrchen vornehmen. Man verdünnt 

 durch oberflächlichen Ausstrich das Material dadurch, daß man mit der 

 Öse bzw. Platinnadel den Ausstrich über dem Kondenswasser beginnt 

 und in Windungen bis zur Spitze fortsetzt; eventuell wird mit der 

 inzwischen nicht abgeglühten Platinöse bzw. Platinnadel der Ausstrich 

 in einem zweiten bzw. dritten Agarröhrchen fortgesetzt. Durch diese 

 Methode bekommt man in den oberen Partien des Köhrchens bzw. in 

 dem zweiten oder dritten Köhrchen isoherte Kolonien. Dieses Verfahren 

 ist besonders dort empfehlenswert, wo es sich um Keime handelt, 

 welche für ihr Wachstum einen Grad von Feuchtigkeit brauchen, den 

 ihnen das Petrischalenverfahren nicht gewährt. 



Einzellenkulturen nach dem Tuscheverfahren von Burri. 



Pelikantusche Nr. 541 (Dr. Grübler & Co., Leipzig) wird 1 : 9 mit 

 destilliertem Wasser verdünnt, gründüch gemischt, in Reagenzgläschen 

 zu Je 10 ccm abgefüllt, im Dampf sterihsiert (^/g Stunde bei einer halben 

 Atmosphäre Überdruck); hierauf soll sie wenigstens 14 Tage stehen, 

 worauf die oberen Schichten der Tuscheemulsion verwandt werden. 

 Man bringt mit einer großen Platinöse vier große Tropfen nebeneinander 

 auf einen ganz reinen und steriUsierten Objektträger. Man verimpft 

 sodann eine Minimalmenge des keimhalti^en Materials unter Verreiben 

 in den ersten Tropfen; mit einer 1 mm-Ose überträgt man eine Spur 

 des ersten Tuschetropf ens in den zweiten, vom zweiten in gleicherweise, 

 ohne die Öse ausgeglüht zu haben, in den dritten, aus dem dritten in 

 den vierten ; aus dem vierten Tropfen entnimmt man mit einer gereinigten 

 und in der Flamme — nicht glühen! — sterihsierten Zeichenfeder 

 etwas infizierte Tusche und erzeugt durch vorsichtiges Tupfen nach- 

 einander eine Serie von Tuschepunkten auf der Oberfläche einer Gela- 

 tineplatte. Nach ^/a Minute werden diese Tuschepunkte mit sterilen 

 Deckgläsern bzw. sterilen Deckglasstückchen einzeln bedeckt. Die 

 mikroskopische Untersuchung mit starken Trockensystemen oder Öl- 

 Immersion läßt die Bakterien als helle scharf begrenzte Objekte zwischen 

 den schwarzen Tuschepartikeln erscheinen. Man stellt nun fest, ob bzw. 

 in welchen Pünktchen die Aussaat einer einzigen Zelle erfolgt ist. Die 

 betreffenden Einzellen(tuschepünktchen) können signiert und in ihrem 

 weiteren Wachstum weiter beobachtet werden. 



Ist das Wachstum auf Gelatine untunhch oder unmöglich (z. B. 

 Bakterien, die nur bei 37" wachsen oder Anaerobier), so kann man sterile 

 Deckglassphtter von 4 qmm zum Bedecken verwenden, mit Trocken- 

 systemen jene Tuschepunkte bestimmen, in welchen nur eine Zelle 

 ausgesät ist; mit einer sterilen Pinzette kann man dann diebetreffenden 

 Deckglassplitter mit den anhaftenden, eine Zelle enthaltenden Tusche- 

 pünktchen in das geeignete Nährmedium bringen. 



