q32 Hans Priiigsheim. 



(XH4),S04 Vng 



KCl 0-05^ 



MgSO^ 0-Obg 



K.HPO, 0-05^ 



Ca (N 03)2 0-01 g 



UJ) dest 1000 g 



Hierauf werden die Kolben gut mit Watte verschlossen und im 

 Dampftopf sterilisiert. Dann werden grobe Feilspäne aus w^eichem Eisen 

 in einem gut verschlossenen Reagenzglas im Trockenschranke eine Stunde 

 lang ca. auf 160° erhitzt. Nachdem man die Kolben aus dem Sterilisator 

 genommen hat, läßt man sie mindestens o Tage lang unter einer leicht 

 mit Watte verschlossenen Glasglocke an der atmosphärischen Luft stehen. 

 Hierauf gibt man in einem sterilen Raum (Impfkasten) von den sterili- 

 sierten Eisenfeilspänen ungefähr 005 g in jeden Kolben und impft mit 

 einer feinen sterilen Pipette aus einer bereits vorhandenen Kultur oder 

 mit Rohmaterial. Für die Herstellung von Reinkulturen empfiehlt es sich, 

 nur junge, schnell wachsende Kulturen, bei denen noch die einzelnen, aus 

 dem Impfmaterial entstandenen Kolonien zu unterscheiden sind, zur Ab- 

 impf ung zu verwenden. Es genügt eine sehr geringe Menge von Impf- 

 material. Hierauf bringt man die geimpften Kolben unter eine (ilasglocke. 

 in die man so viel Kohlensäure einleitet, daß die Luft in der Glocke un- 

 gefähr P/o davon enthält und setzt die Kultur an einen kühlen Ort. Das 

 Wachstum beginnt ungefähr nach 4 Tagen. Die Spirophyllum-Fäden wachsen 

 als zusammenhängende Decke auf dem Roden des Gefäßes über den Eisen- 

 feilspänen oder sie setzen sich als feine hellgelbe Flocken an den Wänden 

 des Gefäßes an. 



Redingungen für Gelingen der Kultur sind: geringer Nährsalzgehalt, 

 getrenntes Sterilisieren der Nährflüssigkeit und des Eisens und Stehen- 

 lassen der Nährflüssigkeit behufs Sättigung mit Sauerstoff und Kohlen- 

 säure. Das offizinelle Eisenpulver oder mit Wasserstoff reduziertes Eisen 

 sind unverwendbar, da diese Eisensorten zu schnell in Oxydhydrat über- 

 gehen. Die groben Feilspäne werden von der im Wasser absorbierten 

 Kohlensäure allmählich als doppelkohlensaures Salz gelöst. Der hierbei ent- 

 standene Wasserstoff sammelt sich zuweilen in Form von großen RIasen 

 unter der ü])er den Feilspänen wachsenden Rakteriendecke an. Wenn die 

 Rakterien in lockeren Flocken in der Kultur wachsen, dann steigt der 

 Wasserstoff in kleinen RIasen an die Oberfläche. Solange sich noch me- 

 tallisches Eisen in der Kultur befindet, ist ihr Gehalt an Eisenoxydul- 

 karbonat annähernd konstant und beträgt 0"OlVo- 



Von 5 Kulturkölbchen, die mit Material geimpft waren, das aus einer 

 llmal übergeimpften Kultur stammte, erwiesen sich zwei als rein. Die 

 Reinheit wurde nicht nur mikroskopisch, sondern auch dadurch erwiesen, 

 daß sterile Peptonlösung und Nährgelatine beim Reimpfen steril bheben. 

 Folgende Einflüsse auf das Wachstum des Spirophyllum sind noch 

 zu beobachten: Temperaturoptimum bei 6", Sauerstoff ist nötig, dagegen 



