Methodik der Stoffwechseluntersucliung liei Mikroorganismen. 979 



Isoli(M-iiii<i' von K iiöllclioiihaktc i-i('ii. 



Diese Bakterioii wurden zncist \o\\ Bo'jerinck^) auf einem Ahsnd 

 von Papilionazeenblättern, Erbsen- oder Fabasten^cln + 1/2% Hohizuckei- 

 + 7"/n Gelatine in Reinkultur gewonnen. Die Kultur erfol«>:te ;inl' l'latten. 

 Man kann auch T'/o Agar, 1% Maltose, 0-l% K« HPO^. OO'i" „ MgSO^ 

 oder einen Dodeue.xtrakt + 0-5" KoHPO^ + l*»; Manidt oder (didxose 

 + IV2V0 Agar verw^enden. 



1 kg Erde wird mit 1 / Wasser 1/2 Stunde bei 1 Atm. fbeidruck im 

 Autoklaven oder mit 2 l Wasser 2 Stunden über freier Flamme eihit/.t: die 

 dann etwa (300 cin^ betragende Flüssigkeit gibt nach Vermischung mit 

 Talg beim Filtrieren dui'ch festes Papier ein völlig klares Filtrat. Die Eid- 

 auszüge sind speziell zur Fortzüchtiing kräftig stickstoffbindendei- Stämme 

 geeignet. 2) 



Als Impfmaterial verwendet man Knöllchen von Papilionazeenwurzelu in 

 frischem Zustande, die man zuerst 2 — o dünnten in eine desinfizierende Flüssig- 

 keit (Salzsäure spez. Gew. 1-20 2h cm\ Sublimat 1 g. Wasser öOO— 1000) 

 einlegt, dann flandiiert und mit sterilen Instrumenten öffnet, um aus dem 

 Innern zur Infektion etwas Material zu entnehmen. Dieses vermischt man 

 auf die übliche Weise mit dem verflüssigten Agar oder der (Jelatine und 

 gießt Platten, die man bei 20" C kultiviert. 3) 



Isolierung von Azotobakter. 



Azotobakter wird angehäuft, indem man Leitungswasser mit 2"/o 

 Mannit und 0-027o K.^HPO^ in dünner Schicht mit O'l 0-2 r/ Gartenerde 

 beimpft und bei 27 — 30" stehen läßt. *) Die Pteinkultur gelingt leicht auf 

 einem durch 2o/o Agar starrgemachteu Mannitnährboden, auf dem der Pilz 

 kleisterartige Kolonien bildet. 



Isolierung von Clostridien. 



In Form eines Clostridiums wurde das erste stickstoffbindende Pakterium 

 isoliert") Es mußte erst von zwei sich bei der Anhäufung gleichzeitig vor- 

 findenden Begleitbakterien getrennt werden. Seine Keinkultur kam nur im 

 Stickstoffstrom zur Bindung des Luftstickstoffs. Trotzdem die Frage, ob 



') Beijerinck, Die Bakterien der Papilionazeenknöllchen. Bot. Ztg. Bd. 46(1888). 

 S. 763. 



'-') Weitere Nahrhödeu bei Löhnis, Handb. d. hiadwirtschaftl. Bakt. Berlin. Gebr. 

 Bornträger. 1910. S. 72G. 



^) Harrison and Barlow, The nodule organism of the Legnminosae — its Iso- 

 lation, cultivation, Identification and commcrcial application. Zentralbl. f Bakt. II. .\bt. 

 Bd. 19 (1907). S. 264. 



*) Beijerinck, Über oligonitrophile Mikroorganismen. Zentralbl. f. Bakt. II. Abt. 

 Bd. 7 (1901). S. 561. 



•^) yViiiof/radski/, Recherches sur l'assimilation de l'azote lil)re de Tatmosphore 

 par les microbes. Arch. des Sciences biol. piibl. par Tlnstitiit imp. de med. expür. k 

 St. Petersbourg. T. 3. p. 297 (1895). 



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