H22 ^- ß- Macallum. 



oder höchstens in einem so geringen Maße nachgewiesen Avorden, daß der- 

 artige Präparate als einwandfrei angesehen werden können. 



Auf Grund der Vorteile, welche die Gefriermethode für die Demon- 

 strierung der Kaliumsalze in Geweben und Organen bietet, ist sie jeden- 

 falls dem Verfahren, bei dem die Gewebselemente ausgezupft werden, ehe 

 sie der Wirkung des Kobaltreagenzes unterliegen, bei weitem vorzuziehen. 



]\Iit derart präparierten Schnitten hat Macallum den Gibbs- 

 Thomsonschen Satz bei Vorgängen des Lebensphänomens untersucht. 

 Er stellte die bei seinen l'ntersuchungen gebrauchten gefrorenen 

 Schnitte in folgender Weise dar: Das Messer, das dabei benutzt wird, 

 kühlt man unter 0» C ab — je niedriger dabei die Temperatur ist. 

 um so besser. Zu diesem Zweck bespritzt man es mit flüssiger Kohlen- 

 säure oder mit etwas flüssiger Luft. Ein Stück des zu untersuchenden 

 gänzlich frischen Gewebes oder Organes wird jetzt auf die Platte des 

 Kohlensäure-Gefriermikrotoms ^) gebracht und mit Kohlensäure so lange 

 behandelt, bis das Gewebe ganz fest gefroren ist. Nun schneidet man und 

 bringt die Schnitte sogleich — während sie noch fest gefroren sind — 

 in das Reagens. Das Messer muß eine Temperatur unter 0" haben, damit 

 die Schnitte darauf flach liegen und flach bleiben können, bis sie in das 

 Reagens eingelegt werden. Sollte während des Schneidens die Temperatur 

 des Messers über O** C steigen, so müßte man sofort wieder abkühlen, ehe 

 man weitere Schnitte ausführt. Wenn ein Schnitt sich zusammenzieht (zu- 

 sammenrollt), ist er nahe am Schmelzpunkt : dann kann, noch ehe er mit 

 dem Reagens zusammenkommt, eine Veränderung in der Verteilung seiner 

 Salze vor sich gehen, besonders kann Diffusion der Kalisalze über die ge- 

 schnittene Oberfläche stattfinden. Derartige Schnitte müssen verworfen 

 werden. Man sollte nur solche benutzen, die, wie wir schon erwähnten, flach 

 und gefroren in das Reagens gebracht werden können. 



Man läßt die Schnitte nun für mindestens 1/2 Stunde oder für einige 

 Stunden in dem Reagens liegen. Der größte Teil des Reagenzes wird dann 

 mittelst einer Pipette abgesaugt. Man fügt eiskaltes W^asser hinzu und 

 rührt nun die Schnitte herum. Man entfernt es dann in vorerwähnter 

 W^eise, setzt frisches eiskaltes Wasser hinzu und beseitigt dieses wieder 

 nach 3 — 5 Minuten. Dieser Prozeß wird 5- oder 6mal wiederholt. Das Aus- 

 waschen soll aber im ganzen nicht mehr als 20 Minuten in Anspruch 

 nehmen ; dies genügt vollständig, um selbst die geringsten Spuren des Re- 

 agenzes zu entfernen. 



Die Schnitte werden jetzt sofort flach auf einen gläsernen Objekt- 

 träger gebracht und in einen Tropfen einer Mischung gleicher Teile Gly- 

 zerins und Ammoniumsulfids eingebettet. Nachdem man dann mit einem 

 Deckgläschen bedeckt hat, kann das Präparat untersucht werden. Die Prä- 

 parate können unbeschränkte Zeit lang aufbewahrt werden, wenn die Ränder 



^) Das Kohlensäure-Gefriermikrotom, das vom Verfasser gebraucht wird, stammt 

 von der Firma Jung in Heidelberg. 



