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Wasserbades bei 10 — 15 mm Druck aufgefangen und die 2. Fraktion bis 

 lOO'^ des Wasserbades bei ebenfalls 10 — 12 mm Druck. Die Destillation 

 erfolgt am besten aus einem Claisenkolben (vgl. Bd. I, 8. 123, Fig. 251). 

 Die Destillate werden in einfachen Destillierkolben aufgefangen (vgl. Bd. I. 

 S. 152, Fig. 317). Die Vorlagen werden vor der Destillation gewogen, 

 um die Ausbeute an Estern feststellen zu können. Die Vorlage ^ird 

 mit einer Kältemischung gekühlt und die Destillation bis zu einer be- 

 stimmten Temperatur so lauge fortgesetzt, bis keine Ester mehr übergehen. 

 Es ist zweckmäßig, ein Thermometer einzuschalten und eventuell die Ein- 

 teilung der Fraktionen nach den Siedepunkten vorzunehmen. Man beobachtet 

 ab und zu, daß der Quecksilberfaden des Thermometers plötzlich sinkt, ein 

 Zeichen, daß in diesem Augenblicke offenbar bei der momentanen Temperatur 

 des Bades nichts mehr übergeht. Die Pause benutzt man zweckmäßig zur 

 Einschaltung einer neuen Vorlage. Da die Ester die Kautschukstopfen an- 

 greifen, ist es zweckmäßig, sie mit einer Korkscheibe nach unten abzu- 

 schließen. Das Destillat muß ganz farblos sein. Die Destillation erfolgt ohne 

 Kapillare. Um Siedeverzug zu vermeiden, fügt man Siedestäbchen oder 

 Siedesteinchen zu. Letztere sind jedesmal zu erneuern, wenn die Destillation 

 unterbrochen wird. 



Bei den zwei folgenden Fraktionen wird unter stark vermindertem 

 Druck destilliert. Entweder verwendet man eine Ölvakuumpumpe (vgl. Bd. I, 

 S. 151ff. ) oder ein nach W7)JiI und LosanitscJi erzeugtes Vakuum. Auf 

 beide Arten erhält man eine Druckverminderung auf O'l — 0"5 mm. Zu- 

 nächst wird bei diesem Druck aus dem Wasserbade bis 100" destilliert 

 und dann eine vierte Fraktion unter Verwendung eines Ölbades von 100 bis 

 180*^ aufgefangen. 



Die drei ersten Fraktionen werden in gleicher Weise sofort verseift, 

 und zwar durch Kochen mit der etwa lOfachen Menge Wasser am Rück- 

 flul.)kühler. Den Grad der Verseifung kontrolliert man durch Prüfung der 

 Beaktion der Flüssigkeit. Solanue sie alkaUsch reaiiiert. sind noch unver- 

 seifte Ester vorhanden. Gewöhnlich ist die Verseifung nach (3 — 8 Stunden 

 beendet. Am besten werden nun alle drei Fraktionen unter vermindertem 

 Druck — jede für sich — im gewogenen Kolben vollständig zur Trockene 

 verdampft. Nur dann, wenn nach dem Abkühlen der verseiften Frak- 

 tionen eine kristallinische Abscheidung erfolgt ist, lohnt es sich, diese 

 zunächst abzufiltrieren und dann das Filtrat einzuengen. Bei leucinreichen 

 Proteinen enthält die 2. und namentUch die 3. Fraktion viel Leucin, und es fällt 

 dann diese Aminosäure beim Abkühlen der verseiften Fraktionen aus. 



Die gewogeneu, eingedampften Fraktionen werden nun mit absolutem 

 Alkohol ausgekocht, um das Prolin in Lösung zu bringen. Das Aus- 

 kochen \nrd wiederholt. Die alkoholischen Lösungen trüben sich meistens 

 beim A])kühlen. Es scheiden sich in absolutem Alkohol uidösliche , mit 

 dem Prolin mitgelöste Aminosäuren aus. Sie werden alifiltriert, und dann 

 die aus allen drei Fraktionen vereinigten alkoholischen Plltrate unter ver- 

 minderten! Druck zur Trockene verdampft. I)er Ilückstand wird wiederum 



