I'artiello llyilrulysf der Nukleinsäuren. 4<j7 



Die Darstclliinf^' der Pyriniidinnukleotido hcrulit auf der größeren Re- 

 sistenz dieser Komplexe im X'ergleich mit den Piirinkomplexen gegenüber 

 der Einwirkung der Mineralsiiuren. Wiilireiid die Piirinkomplexe durch 

 ZAveistündiges iM'hit/en mittelst 2" oiS'^i' Scliwetclsäure vollkommene Aufs|);il- 

 tnni! in riiosphorsäurci'ibose und Hase erleiden, bleiben die l'yrimidinkom- 

 ploxe bei dieser lleliandlunti iiröbtenteils intakt. Die Gewinnung der Sub- 

 stanz wird nun auf folgende Weise ausgeführt: Je 100 // der Nukleinsäure 

 werden in 1 / 2»/oiger Schwefelsäure 2 Stunden am Kückflulikühler im 

 Ölbade bei 125° C gekoeht. Die Flüssigkeit wird nur teilweise gekühlt und 

 mit reinem Silberoxyd bis zu einem Cberschuli an Silber versetzt. Die 

 Silbersalze der Pnriubasen scheiden sich dabei aus. Um die F'ällung zu 

 vervollständigen, läßt man das (icmisch über Nacht stehen und entfernt 

 die Silberpurine durch Filtration. Das Filtrat neutralisiert man mit che- 

 misch reiner Barytliisung. Es scheiden sich dadurch die Silbersalze der 

 Nukleotide mit Silberphosphat aus. Der Niederschlag wird in Schwefel- 

 säure gelöst und mit Schwefelwasserstoff vom Silber befreit. Das Filtrat 

 vom Silbersulfid wird mit Barytlösung genau auf Phenolphtalein neutrali- 

 siert, vom P)arytphosphat abfiltriert und bei vermindertem Druck fast bis 

 zur Trockne eingedampft. Ein Teil der Salze geht dabei in eine in Wasser 

 unlösliche Form über. Das Gemisch wird mittelst Essigsäure in Lösung 

 gebracht und die Lösung in absoluten Alkohol eingetragen. Die Baryumsalze 

 der Nukleotide scheiden sich dabei aus. Dieses Pvohprodukt ist schon voll- 

 ständig frei von Nukleinsäure oder von Purin enthaltenden Komplexen. 

 Beim Arbeiten mit der Hefenukleinsäure läßt sich das schon daran leicht 

 erkennen, daß die Purinkomplexe eine starke Orzinprobe geben und nach 

 kurzer Hydrolyse mittelst Mineralsäure FeliUnt/sdie Lösung reduzieren 

 Dagegen geben die Barytsalze der Pyrimidinuukleotide nur eine ganz 

 schwache Orzinprobe, nach Hydrolyse mittelst Mineralsäuren geben sie mit 

 Silbernitrat keinen Niederschlag der Purinsalze und auch keine Spur einer 

 Reduktion der FtJiHn(/sc\un\ Lösung. Die Substanzen sind optisch aktiv, 

 rechtsdrehend. Sie unterscheiden sich von Purinnukleotiden auch dadurch, 

 daß sie durch Nukleasen nicht angegriffen werden. 



Hydrolyse mit verdünntem Ammoniak. 



Zur Gewinnung der Pyrimidinkomplexe des Zytidins und Uridins aus 

 den Nukleotiden wird auf folgender Weise verfahren. 



Die Lösung der Baryumsalze wird quantitativ von Baryum l)efreit. 

 Die resultierende Lösung reagiert stark sauer. Deswegen wird sie mit 

 wässerigem Ammoniak neutralisiert und dann mit einem Überschuß von 

 Ammoniak bis zu einem Gehalt von HVo versetzt. Die ammoniakalische 

 Lösung wird entweder im Einscliinelzrohre bei 1;35°C oder im Autoklaven 

 bei der Temperatur des Ölbades von 175° C H^'., Stunden erhitzt. Die Iso- 

 lierung der Pyrimidinkomplexe beruht auf ihrer Löslichkeit in Alkohol. Zum 

 Zwecke der Isolierung wird das Hydrolyseprodukt bei vermindertem Druck 

 bis zur Konsistenz eines Sirups eingedampft und der Hückstaud mit Al- 



Abderhalden, Handbach der biochemischen Arbeitsmethodeu. V. 32 



